跨膜型与分泌型tnfα对人混合培养白细胞功能的影响.docVIP

跨膜型与分泌型TNFα对人混合培养白细胞功能的影响 【关键词】 跨膜型 【摘要】 目的 研究和比较跨膜型肿瘤坏死因子-α（transmembrance TNF-α，mTNF）和分泌型TNF-α（secreted TNF-α，sTNF）对细胞毒T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL）功能的影响。 方法 采用单向混合淋巴细胞培养的方法，获取针对同种异体MHC分子的CTL。 结果 相同的刺激细胞经ConA刺激后作为靶细胞，成功建立了CTL实验模型;混合培养白细胞（mixed leukocyte culture，MLC），与靶细胞作用后，两型TNF-α均有表达:mTNF-α表达增加约2倍（Plt;0.05），sTNF-α增加3倍（Plt;0.05）;MLC与抗TNF-α抗体预先作用，再加入靶细胞，该抗体不能有效阻断其杀伤作用;相同剂量两型外源性TNF-α与MLC作用24h后，对MLC的杀伤作用不明显。 结论 两型外源性TNF-α对MLC作用差异无显著性。 关键词 跨膜型肿瘤坏死因子 分泌型肿瘤坏死因子 细胞毒T淋巴细胞 Effect of secreted and transmembrane tumor necrosis factor-αon the functions of human MLC 【Abstract】 Objective To study and compare the effect of mTNF-αand sTNF-αon the cytotoxic function of CTL.Methods CTL specific for allogenic MHC was taken by one-way mixed lymphocytes culture.Results Ex-perimental model of CTL used as target cells was succeeded stimulated by ConA.The two forms of TNF-αwere ex-pressed after the MLC reacted with their target cells.The mTNF-αelevated by2folds（Plt;0.05）vs sTNF-αele-vated by3folds（Plt;0.05）.After primed with the antibody of TNF-αand reacted with their target cells the anti-body could not block the cytotoxicity of MLC.MLC were challenged with the two forms of exogenous TNF-αin samedose.Conclusion The cytotoxic effect of the two forms of TNF-αon the MLC is inapparent. Key words transmembrane TNF-α secreted TNF-α cytotoxic T lymphocytes TNF-α是由激活的单核/巨噬细胞、细胞毒T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL）等分泌产生的一种重要的细胞因子。TNF-α分布广泛，几乎表达于所有正常及多种肿瘤细胞表面 ［1］ ，由此也决定了TNF-α广泛的生理活性。TNF-α有两种存在形式，即26kD的跨膜型和17kD的分泌型，前者为后者的前体 ［2］ 。CTL是机体细胞免疫应答中重要的效应细胞，它广泛地参与机体的抗肿瘤、抗病毒及胞内菌感染以及移植排斥反应等免疫过程。它有两个基本的细胞毒机制:通过胞吐作用分泌穿孔素颗粒酶等，直接对靶细胞进行杀伤，或是通过表达FasL、TNF等，与靶细胞表面相应的受体作用，诱导靶细胞凋亡或坏死 ［3］ 。目前国内外关于TNF-α对CTL作用的研究主要集中在TNF-α对CTL发育成熟的影响，关于TNF-α对活化的效应性CTL杀伤功能的研究则较少，而且这些研究几乎都是针对sTNF-α进行的。有关mTNF-α对效应性CTL细胞毒功能的影响则未见报道。本课题研究mTNF-α和sTNF-α对CTL细胞毒功能影响的异同，以期阐明跨膜型和分泌型TNF-α生物学特征及生物学作用的规律。根据临床需要，通过改变该细胞因子类型而对CTL功能进行调控，从而为临床治疗有关疾病提供新的线索及实验依据。 1 材料与方法 1.1 材料 RPMI1640干粉，DMEM干粉（GIBCO