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老龄肾阳虚证的差异表达基因谱分析 作者：李炜弘 雍小嘉 范怀昌 谭从娥 张天娥 王米渠 【摘要】 　　目的采用基因表达谱芯片技术，分析老龄肾阳虚证的发生与基因表达异常间的联系。方法筛选肾阳虚证患者3名和正常对照者3名，采用美国Affymetrix公司的HG-u133Plus 2.0基因表达谱芯片，通过组间比较，筛选出老龄肾阳虚患者差异表达基因。结果芯片数据组间比较分析后获得34条差异表达基因，聚类分析得到6条有特征性地差异表达基因，主要涉及细胞周期和凋亡，肿瘤发生以及免疫。结论老龄肾阳虚证的发生涉及一系列免疫紊乱的复杂的过程，可能与个体的衰老存在密切关联。 【关键词】 肾阳虚证 差异表达基因 免疫 衰老 　　Abstract：ObjectiveTo explore the relevance between aged kidney-Yang deficiency syndrome and the differentially expressed genes by cDNA arrary.MethodsThree kidney-Yang deficiency patients and three healthy people were selected as samples during the epidemiologic survey of the kidney-Yang deficiency syndrome. The differentially expressed genes were screened by applying HG-u133Plus2.0 of Affymetrix GeneChip.Results34 common differentially expressed genes were obtained after comparison between patients and healthy peoples. 6 differentially expressed genes which are related to cell cycle, apoptosis, tumorigenesis and immunity were obtained by cluster analysis.ConclusionThe aged kidney-Yang deficiency syndrome is related to the dysfunction of the immune system, may be closed related to body ageing as well. 　　Key words：kidney-Yang deficiency; Differentially expressed gene; Immune response; Ageing 　　随着人类基因组计划的深入，尤其是功能基因组学研究技术的不断发展，在基因表达谱芯片技术平台上［1］开展的“证候-基因表达谱”研究从一个新的视角，系统、全面地深化人们对中医证候的认识，把证候与分子网络的功能联系起来。在以往对肾阳虚的研究中，已进行肾阳虚半定量化操作标准［2］以及虚寒证、心阳虚证等基因芯片实验研究［3］提示，肾阳虚证一定具有特定的分子生物学基础；肾阳虚的辨证论治其理其法在基因水平、分子水平有深层次的科学依据。研究中还发现年龄是“证”的基因表达不可忽略的影响因素，而肾阳虚证在老龄人群中占有较大比例。结合多年“证候－基因组”研究的经验，笔者选用国际公认的美国Affymetrix公司的人全基因组表达谱芯片，开展了特定老龄人群肾阳虚证的差异基因表达谱的分析研究，探讨老龄肾阳虚证所涉及的分子生物学过程，为进一步揭示肾阳虚证的本质奠定基础。 　　1 研究对象 　　在60岁以上老龄人群肾阳虚证的流行病学调查过程中筛选了3例肾阳虚证患者，年龄在60～70岁之间，体检无西医诊断的器质性疾病，经中医专家诊断和肾阳虚证量表［2］评分相结合，符合典型肾阳虚证诊断。另外，选取同年龄段、性别一致的3例健康老人为正常对照，此3例对照者经体检，均无西医诊断的器质性疾病，无身体不适症状，并经过中医专家诊断和肾阳虚证量表评分，均无肾阳虚临床表征。 　　2 方法 　　2.1 提取总RNA分别采取肾阳虚证患者与正常人的空腹静脉血10 ml，裂解红细胞，分离获得白细胞，采用Trizol法提取总RNA，并对总RNA进行定量、质检。 　　2.2 基因芯片检测利用单轮cRNA扩增、生物素标记法对样品进行靶标制备，然后用于芯片杂交；芯片采用美国Affymetrix公司的HG-u133