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4.三种常用灭菌方法的比较 灭菌 方法 适用材料或用具 灭菌条件 灭菌时间 ____ 灭菌 接种环、接种针或其他金属工具 酒精灯火焰的充分燃烧层 直至烧红 干热 灭菌 玻璃器皿(吸管、培养皿) 和金属用具等 __________内,160~170 ℃ 1~2 h 高压蒸 汽灭菌 ________等 100 kPa,121 ℃ 15~30 min 灼烧 干热灭菌箱 培养基 5.平板划线法和稀释涂布平板法的比较 比较 平板划线法 稀释涂布平板法 操作注意事项 (1)接种环的灼烧 ①第一次划线前:杀死残留微生 物,避免污染菌种和培养基 ②每次划线前:都需要灼烧接种环进行灭菌,____残留菌种,保证每次划线菌种来自上次划线末端 ③划线操作结束后:仍需灼烧接种环,杀死残留菌种,避免污染环境和感染操作者 (2)灼烧接种环之后,要____后才能伸入菌液,以免温度太高杀死菌种 (3)划线时最后一区域不要与第一区域相连 (4)划线用力要大小适当,防止用力过大将培养基划破 (1)稀释操作时:每支试管及其中的9 mL水、移液管均需灭菌;操作时,试管口和移液管应在离火焰1~2 cm处 (2)涂布平板时: a.涂布器用70%的酒精消毒,取出时,多余酒精在烧杯中滴尽,然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃 b.不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中,以免引燃其中的酒精 c.酒精灯与培养皿距离要适合,移液管头不要接触任何物体 杀死 冷却 比较 平板划线法 稀释涂布平板法 目的 获得单细胞菌落:在培养基上形成的由单个菌种繁殖而来的子细胞群体 培养 平板冷凝后______培养,使培养基表面的水分更好地挥发,防止皿盖上水珠落入培养基造成污染 (续上表) 倒置 考点2 传统发酵技术 1.果酒、果醋、腐乳、泡菜制作过程中所用菌种及控制条件的比较 果酒 果醋 腐乳 泡菜 菌种 ______ 醋酸菌 ____ 乳酸菌 控制 条件 O2的有无 无氧 ______ 有氧 ______ 最适温度 18~25 ℃ 30~35 ℃ 15~18 ℃ 常温 酵母菌 毛霉 有氧 无氧 2.测定亚硝酸盐含量 (1)亚硝酸盐危害:当摄入总量较多时,可引起______或死亡。在特定条件(适宜温度、pH和微生物作用)下,亚硝酸盐可以转变成致癌物——________。 (2)①NO+对氨基苯磺酸→反应物; 反应物+N-1—萘基乙二胺盐酸盐→________染料。 ②亚硝酸盐溶液的浓度高,颜色 __________;溶液浓度____,颜色浅些。 (3)检测步骤:配制溶液→制备___________→制备样品处理液→________。 中毒 亚硝酸 玫瑰红色 深些 低 标准显色液 比色 整合一 微生物的培养和应用 1.微生物的分离和计数 (1)土壤中分解尿素的细菌的分离与计数。 ①筛选菌株:利用选择培养基筛选菌株。 ②测定微生物数量的常用方法:统计菌落数目和显微镜直接计数。 ③过程:土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察。 (2)分解纤维素的微生物的分离。 ①实验原理: 即:可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 ②流程: 土壤取样→选择培养→梯度稀释→涂布平板→挑选菌落。 2.统计菌落数目的方法——稀释涂布平板法(也叫活菌计数法) (1)原理。 当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌,通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品大约含有多少个活菌。 (2)操作。 ①设置重复组,增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列10倍稀释,然后选择三个稀释度的菌液,分别取0.1 mL 接种到已制备好的平板上,然后用无菌涂布棒将菌液涂布整个平板表面,放在适宜的温度下培养,计算菌落数。为使结果接近真实值,可将同一稀释度加到三个或三个以上的平板上,经涂布、培养,计算出菌落平均数。 ②为了保证结果准确,一般选择菌落数在30~300个的平板进行计数,若设置的重复组中结果相差太远,意味着操作有误,需重新实验。 (3)计算公式。 对位训练 1.(2013年新课标卷Ⅱ)临床试用抗生素前,有时需要做细菌耐药实验。实验时,首先要从病人身上获取少量样本,然后按照一定的实验步骤操作,以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。 回答下列问题: (1)为了从样本中获取致病菌菌落,可用________法或________法将样本借种于固体培养基表面,经过选择培养、鉴别等步骤获得。 (2)取该单菌落适当稀释,用________法接种于固体培养基表面,在37℃培养箱中培养24h,使其均匀生长,布满平板。 (3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性,将分别含有A,B,
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