第四章 生物制品生产的基本技术 生物制品学 教学课件.pptVIP

第四章 生物制品生产的 基本技术 主讲教师：赵凯 博士 E-mail：zk395@ 电 话（三）、基因重组选育培养法 基因重组技术选育培养菌(毒、虫)种是上世纪80年代发展起来的一项新技术，是将编码保护性抗原的目的基因导入载体中，使之得到表达，产生大量保护性抗原蛋白，并可用作疫苗。用这种方法生产的疫苗称为基因工程疫苗。 目前用这种方法选育和研制成功的有大肠杆菌K88、K99重组菌株，用大肠杆菌表达口蹄疫抗原，在牛痘病中表达狂犬病病毒的表面糖蛋白等。 这一技术的建立和发展，不仅能够把各种微生物的基因进行如愿重组，使没有可用疫苗或虽有疫苗而在生产上存在很大困难的疾病的免疫预防得到可能的解决，而且将有许多更安全有效的重组基因工程疫苗代替常规疫苗制品。这一技术将为疫苗研制开辟广阔的前景。 （四）、菌（毒、虫）种的保藏 微生物一旦被入选为种子，应立即冻干并保存。 冻干后的细菌于4℃的条件下保存；冻干后的病毒在低于-20 ℃的条件下保存。这样可以保存多年而形状不改变。 为避免污染动物内源性细菌和病毒，入选的菌（毒、虫）种不应再通过动物体传代。如果通过动物体传代，分离物必须按照新的菌（毒、虫）种对待进行全部测定，证明可以使用后，保存备用。 保存的菌（毒、虫）种使用时，传代后应测定其理化性状、毒力和免疫原性，符合标准者方可使用。 第二节、生物制品的灭活剂与保护剂 一、灭活与灭活剂Inactivation and Inactivator 凡破坏微生物的生物学活性及血清中补体活性，或破坏病原微生物的繁殖能力和致病作用，均称之为“灭活”。 适当的灭活剂和灭活方法，对微生物抗原性及免疫原性没有影响。 研究灭活生物制品，重要条件是选择适当的灭活剂和灭活方法。 一、灭活与灭活剂 （一）、物理学方法灭活 一般常用加热杀菌、超声波裂解细胞、射线照射杀死微生物体或消除其毒性。 采用此类灭活方法应注意，加热处理以放水浴间接升温为好；超声波裂解应放冰浴中间断进行；60Co照射处理，应根据被照射物的容量大小选择照射物与钴源的距离和剂量。 一、灭活与灭活剂 据试验用l0000mL大玻瓶装6000mL的血清或血液，当吸收60Co量达200万rad/时能完全杀死芽孢杆菌，150万rad/时可使非芽孢菌完全灭活。照射后的血清或裂解红细胞全血的质量不受影响，经测定17种氨基酸含量与非照射的血清无差异。 对病毒的灭活试验结果为：含鸡新城疫病毒的鸡胚尿囊液，吸收60Co剂量达50万rad/时完全灭活，猪瘟病毒强毒吸收量达到300万rad/时完全失去致病力。被60Co照射处理的血清，用于细胞培养与未照射的血清均产毒效果良好；被照射处理的裂解全血，不影响牛出败菌及禽霍乱菌的生长，制出的菌苗效力良好。 * * * * 第一节 菌(毒、虫)种的选育培养与保藏 一、生物制品菌(毒、虫)种的分类 生物制品中使用的菌(毒、虫)种的范围很广泛，包括生产和检定疫苗、毒素、类毒素、抗血清以及诊断用品等的菌(毒、虫)种，并随着生物制品种类的增多和生物制品技术的发展，菌(毒、虫)种的内容也会不断增加。 （一）、按菌(毒、虫)种的毒力分类 1、强毒菌(毒、虫)种 是指具有强大致病力的菌(毒、虫)种，一般免疫原性也良好，常用于制造某些灭活疫苗，抗血清以及疫苗效力检验。 2、弱毒菌(毒、虫)种 是指对动物无致病力而具有一定免疫原性的菌(毒、虫)种，主要用于制造弱毒活苗。 （二）、按菌(毒、虫)种的用途分类 1、生产用菌(毒、虫)种 是指用于生产生物制品的菌(毒、虫)种，即指生产疫苗、抗毒素、类毒素、抗血清及诊断用品的菌、毒种。 如生产猪瘟兔化弱毒疫苗用的猪瘟种毒，生产破伤风类毒素的破伤风菌种，生产炭疽抗血清的Ⅱ号炭疽杆菌C40～22菌种，制造牛型结核菌素的牛型结核杆菌菌种等． （二）、按菌(毒、虫)种的用途分类 2、检定用菌(毒、虫）种 是指用于检定生物制品效力等菌(毒、虫)种。如效力检验中攻毒用的新城疫强毒，猪丹毒强毒菌种等。另外，还包括用于检定诊断血清交叉反应的菌（毒、虫）种。 3、工具用菌（毒、虫）种 是指在生物制品生产中作为工具使用的菌（毒、虫）种。如基因工程中表达某些异种抗原用的宿主大肠杆菌、枯草杆菌、酵母菌等。 二、生物制品中菌(毒、虫)种的条件 菌（毒、虫）种是决定生物制品质量的重要因素，悬于培养好的菌（毒、虫）种也是生物制品工作中最重要的一环。好的菌（毒、虫）种应具备如下条件。 （一）、具有良好的免疫原性 由于生物制品主要是免疫制剂，故耍求菌(毒、虫)种应具有良好的免疫原性，使用后能产生坚强的体液免疫和细胞免疫，并持续较长时间，同时对某些菌(毒，虫)种而言还应是抗原谱广。 一般来说，动物接种后产生80％以上的保护即为有良好的免疫原性。因为