实验内容及操作步骤.ppt

实验一 紫外－可见分光光度计的性能检验 实验二 吸收曲线的测绘及吸收系数的测定 实验三 分光光度法测定槐花中总黄酮的含量 实验四、薄层板的制备 一、实验目的 掌握薄层板的制板方法。 二、仪器与试剂 天平（0.1g） 研钵 玻璃板 10 cm×20cm CMC-Na水溶液 （3‰） 蒸馏水 薄层层析用硅胶GF254（青岛海洋化工厂） 三、实验内容及操作步骤 1. 洗板 选取板面平整的玻璃板，洗净后放置在干净、平整的台面上，阴干备用。 四、思考题 1．薄层板的铺制过程中应注意哪些问题？ 实验五 薄层色谱定性分析  （五味子的定性鉴别） 一、实验目的 1. 掌握薄层色谱的定性分析方法。 2. 熟悉薄层板的点样方法。 二、实验原理 中药五味子中，五味子甲素为其主要有效成分之一，为了更好的进行定性鉴别，选用五味子甲素对照品和五味子对照药材进行对照，根据相同的组分在相同的条件下，应该有相同的颜色和比移值来作为定性鉴别的依据。 三、仪器与试剂 定量毛细管 已制备好的薄层板（硅胶GF254 ） 展开缸 所用试剂均为分析纯 五味子粉末 四、实验内容及操作步骤 1.供试品液的制备：取五味子粉末1g，加三氯甲烷20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品液。 2.对照药材溶液的制备：取五味子对照药材1g，同法制成对照药材溶液。 3.对照品溶液的制备：取五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成每ml含1mg的对照品溶液。 4. 吸取上述三种溶液各2μl，点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚（30～60℃）－甲酸乙酯－甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 五、思考题 1．如何克服薄层展开过程中的边缘效应？引起边缘效应的因素有哪些？ 实验六、高效液相色谱仪的使用 一、实验目的 掌握高效液相色谱仪的使用方法 了解高效液相色谱仪的结构 高效液相流程图 1 溶剂贮器,2 泵,3 流量与速度检测装置, 4 进样阀,5 预柱(保护柱),6 分离柱(色谱柱), 7 检测器,8 数据记录及处理系统,9 废液瓶 二、仪器与试剂 L-2000液相色谱仪（L-2400紫外检测器） C18反相键合色谱柱（250 mm×4.6 mm） 微量进样器（25μl） 过滤器（0.45μm）及脱气装置 苯、甲苯、萘 甲醇（色谱纯） 重蒸馏水 三、实验内容与步骤 （一）流动相的预处理 1．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。 2．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。 （二）安装色谱柱 按色谱柱标示意流液方向安装好色谱柱。 （三）液相色谱仪的使用方法 1.启动液相色谱仪 2.排除管道内空气3.泵流速的设定4.检测器波长的设定5.打开T2000P色谱工作站6.色谱柱预平衡7．进样 8.数据采集完毕后，点击停止进样 9.点击“再处理”和“报告”图标对图谱进行再处理，出报告图 10.实验完毕后冲洗色谱柱 11.关闭工作站，关闭输液泵电源，关闭检测器电源、关闭仪器电源 练习液相色谱仪使用的色谱条件、样品溶液和进样量 ??色谱条件 流动相为甲醇∶水（80∶20）； 固定相:C18反相键合色谱柱； 检测波长为254nm； 流速：1ml/min。 样品溶液 含苯、甲苯、萘浓度分别为1μg/ml的甲醇溶液。 进样量 ：10μl。 四、思考题 流动相在洗脱前为何要进行脱气？ 实验七、高效液相色谱定性及定量分析—中药赤芍中芍药苷的定性鉴别和含量测定 一、实验目的 1.掌握利用高效液相色谱法进行定性 及定量分析。 2.巩固高效液相色谱仪的使用方法。 1.采用与已知化合物对照,对组分进行定  性分析。 2.采用外标一点法进行含量测定。 二、实验原理 三、仪器与试剂 L-2000液相色谱仪（L-2400紫外检测器） C18反相键合色谱柱（250 mm×4.6 mm） 微量进样器（25μl） 芍药苷对照品；赤芍药材 其余试剂均为分析纯 四、实验内容及操作步骤 色谱条件 C18反相键合色谱柱； 流动相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液（40∶65）； 检测波长为230nm。 对照品溶液的制备 精密称取五氧化二磷干燥36小时