微生物的实验室培养2014XU研究报告.ppt

* 本资料来自于资源最齐全的２１世纪教育网 * 思考讨论： 1、稀释涂布平板法接种的目的是什么？ 2、稀释涂布平板法接种的用途？ 3、平板划线法能不能调查某种微生物的种群密度（计数）？ 获得单一菌落。 微生物的分离、鉴定、筛选、计数。 不能；一是不知道接种菌液的量，其次也没有全部形成单一菌落。 10-1 10-4 10-5 10-6 平板划线法 稀释涂布平板法 相同点：分散出单细菌形成单菌落来分离菌种 不同点：分别通过划线和稀释分散出单细菌，稀释涂布平板法除分离菌种外还可以对微生物计数 （二）纯化大肠杆菌 1、将准备培养的菌种放到培养基中的过程叫做__________。 2、微生物接种的最常用方法是________________和_________________ 3、能够获得单一菌落的(分离）接种方法有_______________和________________ 4、能够测定样品中活菌数的接种方法是_______________ 平板划线法 稀释涂布平板法 接种 平板划线法 稀释涂布平板法 稀释涂布平板法 笔记 （二）纯化大肠杆菌 5、在接种前检测培养基是否被污染的方法____________________________________ _____________________________________ 6、使用过的培养基必须经过________处 理,才能遗弃。 ７、利用稀释涂布平板法统计细菌数目时，为了保证结果的准确性，一般选择菌落数在____________的平板进行计数。 将未接种的固体培养基在无菌条件下 放置一段时间，观察是否有菌落产生 笔记 灭菌 30～300 纯化大肠杆菌：接种 平板划线法:分离 稀释涂布平板法：分离、计数 方法 培养基的制备 ① 计算 ②称量 ③溶化 ④调pH ⑤灭菌 ⑥倒平板 （二）纯化大肠杆菌 统计菌落数目 显微镜直接计数法： 稀释涂布平板计数法： 选择菌落数在30-300的平板进行记数。 设置重复组：同一稀释度涂3个或以上的平板, 计算菌落平均数。 设置对照：将未接种或接种等量无菌水的培养 基同时进行培养。 注意 不能区分死菌和活菌,比实际多 比实际少 菌种的保存 1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。 2、长期保存：甘油冷冻管藏法 * 本资料来自于资源最齐全的２１世纪教育网 * * 本资料来自于资源最齐全的２１世纪教育网 * 本资料来自于资源最齐全的２１世纪教育网 * * * 本资料来自于资源最齐全的２１世纪教育网 * 本资料来自于资源最齐全的２１世纪教育网 * 本资料来自于资源最齐全的２１世纪教育网 * 本资料来自于资源最齐全的２１世纪教育网 * * 本资料来自于资源最齐全的２１世纪教育网 * * * * 本资料来自于资源最齐全的２１世纪教育网 * 本资料来自于资源最齐全的２１世纪教育网 * 本资料来自于资源最齐全的２１世纪教育网 * 本资料来自于资源最齐全的２１世纪教育网 * 本资料来自于资源最齐全的２１世纪教育网 * * 本资料来自于资源最齐全的２１世纪教育网 * 本资料来自于资源最齐全的２１世纪教育网 选择培养基（笔记） 选择培养基 筛选、分离的细胞 加入青霉素 无氮培养基 无碳培养基 依标记基因，加入某种抗生素等 酵母菌、霉菌等真菌 固氮菌 自养型细菌 导入了重组DNA的受体细胞 思考： 1、所有的培养基都必须含碳源、氮源、水、 无机盐吗？ 2、培养基中的营养要素，除了水以外的无机 物只能是无机盐？ 3、CO2既是自养型生物的碳源也是能源物质？ 4、利用动物细胞培养液培养病毒，行吗？ 否；可以无碳源，也可无氮源 否；碳源和氮源也可能是无机物 否；光能或化学能 病毒无细胞结构，只能寄生在活细胞中生存。所以，要利用活细胞培养病毒。 （三）无菌技术 防止外来杂菌入侵。 方法： 消毒 (温和) 灭菌 (强烈) 煮沸: 巴氏：80 ℃ 下煮15min 化学药剂: 75%酒精、氯气 紫外线消毒： 灼烧灭菌： 干热灭菌：。 高压蒸气灭菌： 获得纯净培养物的关键： 无菌技术 1、获取纯化培养物的关键是防止外来杂菌 的入侵。 2、无菌措施： 1)对实验操作空间、操作者衣着和手进行清洁和消毒；对将培养用的器皿、接种工具和培养基进行灭菌 2)实验操作时已灭菌材料等应避免与周围物品接触；实验操作应在酒精灯火焰附近进行；接种工具等应在酒精等火焰上灼烧后使用 1、获得纯净培养物的关键是什么？ 2、避免杂菌污染的方法主要包括哪四个方面?(15页）