微生物的实验室培养第2课时阳腊梅研究报告.pptVIP

专题2 :微生物的培养与应用 基础知识再现： 1、与液体培养基相比，固体培养基在成分上还应加入 。 2、各种培养基的成分各不相同，但一般都含有 、 、 和 。 灭菌方法 对 象 所用设备、仪器或试剂 灼烧灭菌 干热灭菌 高压蒸汽灭菌 接种针、接种环、试管口、锥形瓶口等 酒精灯（外焰） 玻璃器皿、金属用具等 培养基 干热灭菌箱 高压蒸汽灭菌锅 消毒方法 对 象 方法、设备或试剂 饮用水、汤状食物等 煮沸消毒法 100℃ 5~6min 巴氏消毒法 化学剂消毒法 双手 不耐高温的液体 70~75℃ 30min 水源 接种室、接种箱、超净工作台表面 紫外线 酒精 氯气 石碳酸或煤酚皂溶液 空气、接种室、接种箱、超净工作台表面 紫光灯 进行大肠杆菌的纯化培养，即获得较多纯净的大肠杆菌菌种。 制备培养基 纯化大肠杆菌 计算 溶化 灭菌 称量 倒平板 根据牛肉膏蛋白胨配方的比例 牛肉膏、蛋白胨易吸潮，称量需迅速 称量纸与牛肉膏一同放入烧杯，后挑出；最后加琼脂；不断搅拌；最后要定容。 培养基→高压蒸汽灭菌（用法见85页） 培养皿→干热灭菌 教材17页图示流程。 1、不烫手即可。 2、防止瓶口的微生物污染培养基。 3、防止皿盖上的水珠落入培养基，使培养基污染同时避免培养基中的水分过快地挥发。 4、不能。空气中的微生物可能在此滋生，进而污染整个培养基。 接种 恒温培养 保藏菌种 得到纯净的菌种 在固体培养基上得到单菌落 必须对菌液进行稀释 由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。 原理：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 操作方法：见教材18页。 1、 灼烧时间 操作前 每次划线结束 划线结束 灼烧接种环的目的 杀死接种环上原有的杂菌 杀死上次划线后接种环上残留的菌种，保证本次划线的菌种只来自上次划线的末端，从而达到稀释的目的 防止细菌感染实验人员和污染环境 2、避免接种环温度太高，杀死菌种。 3、划线后，线条末端细菌的细菌数目比起始处少，从上次划线末端开始，能使细菌数目随着划线次数的增加逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 原理：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 操作方法：见教材19页。 注意事项： 用于稀释的水、试管、移液管等要事先灭菌。 每次注入菌液后要吹吸三次，使菌液与水充分混匀。 操作时，试管口和移液管应在离火焰1-2cm处。 讨论： 第二步应如何进行无菌操作？ 注意事项： 方法：将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃中，培养12h和24h后，分别观察并记录结果。 思考：培养一个未接种的培养基的目的是什么？ 补充：大肠杆菌的检测可用伊红—美蓝试剂，见26页旁栏。 保藏方法 具体方法 条件和注意事项 临时保藏 长期保藏 将菌种接种在试管斜面固体培养基上 4℃ 冰箱，每3—6个月要重新传代 1ml甘油和1ml菌液充分混匀 -20℃ 冰冻箱， * * * * * * * *