试验各种试剂的配制方法.doc

组织培养实验有关试剂的配制： MS培养基储备液的配制 成分 1升储备液用量（mg） 每升培养基取用量（ml） 20*储备液1（大量元素） NH4NO3 KNO3 CaCl2.2H2O MgSO4.7H2O KH2PO4 33000 38000 8800 7400 3400 50 200*储备液2（微量元素） KI H3O3 MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCl2.6H2O 166 1240 4460 1720 50 5 5 5 200*储备液3（铁盐） FeSO4.7H2O Na2.EDTA.2H2O 5560 7460 5 200*储备液4（有机成分） 肌醇 烟酸 盐酸吡哆醇 盐酸硫胺素 甘氨酸 20000 100 100 20 400 5 次氯酸纳消毒液：取30ml次氯酸纳溶液，用蒸馏水定容至100ml。现配现用。 75%的酒精：75ml的95%的酒精加水定容至95ml。 0.2％的升汞溶液：称取HgCl2 20克，加蒸馏水至4000ml。 1N 盐酸：取8.25ml的浓盐酸，加蒸馏水定容至100ml。 1N NaOH：称8g NaOH，用蒸馏水定容至200ml。 0.1mg/ml的2,4-D溶液：取25mg的2,4-D，加入少量95%的酒精和1N的NaOH溶解，再加蒸馏水定容至250ml。 0.1mg/ml 的6-A溶液：取25mg的6-A，用少量1N的盐酸溶解，再加蒸馏水定容至250ml。 遗传转化与GUS基因检测的试剂配制 L培养基的配制：将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 10g 酵母提取物 5g 氯化钠 10g 如果需要用1N NaOH（10～15ml）调整pH至7.0，再补足水至1L 10ml 的10mmol/l的AS（乙酰丁香酮）母液（100x）配制：称19.6mg的AS，先溶于少量甲醇中，然后慢慢加蒸馏水定容至10ml，过滤除菌，分装成200ul/管（每组1管），使用时将200ul的AS母液加入20ml的MS液体培养基中。 50mmol/l的磷酸钠缓冲液（pH 7.0）：A液：取NaH2PO4.2H2O 3.12g溶于蒸馏水，定溶至100ml。 液：取Na2HPO4.12H2O 7.17g溶于蒸馏水，定溶100ml。取A液39ml与 液61ml混合，定容至400ml，调PH至7.0。 50mmol/L铁氰化钾母液：称3.295g，用蒸馏水定容至200ml 50mmol/l亚铁氰化钾母液：称4.224g ，用蒸馏水定容至200ml。 0.5mol/l EDTA母液（pH8.0）： 药品 分子量 100ml 500ml EDTA Na2 2H2O 372.24 18.6g 93.06g 双蒸H2O 80ml 400ml 用NaOH调PH至8.0 6g 10g DdH2O定容至 100ml 500ml GUS检测液的配制：100mgGluc，先溶于1ml的DMF。取80ml 50mmol/l的磷酸钠缓冲液（pH 7.0），加入1ml 50mmol/L铁氰化钾、1ml 50mmol/L亚铁氰化钾和2ml 0.5mol/l EDTA（PH 8.0），再加入已溶解的Gluc，再加20ml的甲醇，混匀。（配制方法参考《现代植物生理学实验指南》p348） 将配好的GUS检测液分装于1.5ml的小管中（1ml/管，1组1管），－20°C保存备用。 鲜花保鲜及超氧物歧化酶活性测定 50mmol/l的磷酸钠缓冲液（pH 7.0）： A：NaH2PO4.2H2O 3.12g溶于蒸馏水，定溶至100ml。 液：Na2HPO4.12H2O 7.17g溶于蒸馏水，定溶至100ml。 取A液39ml与 液61ml混合，定容至400ml。PH7.0。 50mmol/l的磷酸钠缓冲液（pH 7.8）： 取A液8.5ml与 液91.5ml混合，定容至400ml。PH7.8。 SOD提取液：50 mmol/L磷酸缓冲液 [含0.1mmol/L EDTA；0.3%(w/v) Triton X-100；4%（w/v）聚乙烯聚吡咯烷酮（pvpp,polyvinylpolyrrolidone）, pH7.8] pvpp比较难溶，多晃动几次，再静置一会，慢慢就会溶解。 14.5 mmol/L dl－甲硫氨酸：即2.163克/L，称2.163g，用蒸馏水定容至1L（较难溶，需稍微