分子生物学常用核酸分子探针简介.pptVIP

核酸染色剂及荧光探针的应用 溶液中核酸的定量测定 单分子核酸检测 核酸的凝胶染色体电泳分离检测 在荧光共振能量转移（FRET）技术中的应用 DNA序列分析 DNA序列分析中的荧光染料：在电泳分离荧光法检测DNA 序列分析中，通常分四组（A,C,G,T体系）进行，如果用 四种不同的荧光染料为探针,标记一个共同的引物，分别 用在 A、C、G、T四个反应体系中，等于用不同的探针 专一地标记了不同的碱基，利用各荧光探针光谱的差别 便可把不同的碱基区分开,因此选择一组四种合适的染料 成为关键， 它们应满足以下条件： (1)吸收和发射光谱应在可见光区，以降低散射和荧光背景； (2)各染料的荧光发射波长因该有明显不同，以便区分不同染料; (3)应有很强的荧光强度，以获得高灵敏度； (4)不严重干扰引物的杂交作用，使其不影响测序反应效率； (5)染料的存在不严重改变电泳谱图。 表二：菲啶和口丫啶类嵌入剂及其 与DNA结合物的有关性能 表三：含吲哚和苯并咪唑类嵌入剂及其 与DNA结合物的有关性能 核酸分子探针种类：目前作为核酸分子探针的有机 分子染料有几十种，按探针分子结构可分为： 菲啶和口丫啶类染料、吲哚和咪唑类染料、 碳菁阳离子染料、苯并呋喃酮（香豆素）类等。 表四：TOTO-1系列染料及其 与DNA结合物的有关性能 探针序号 溶解性 λmax/nm ε*103/（1mol-1*cm-1）　 　 (λex/λem)/nm 性能及应用 溶剂 1 H2O DMSO 518 5.2 518/605 不渗透膜；双股DNA嵌入剂；死细胞染色；染色体计数染色；电泳；流动细胞光度法；氩-离子激光 甲醇 2 H2O， DMF 535 5.8 536/617 不渗透膜；死细胞染色；染色体和细胞计数染色 甲醇 3 DMSO 518 3.9 518/600 渗透膜；染色核酸和真核生物及一些细菌的细胞质 甲醇 4 DMF 500 53 500/526 渗透膜；RNA/DNA的辨别测定；溶酶体标记；流动细胞光度法 水或 甲醇 5 DMSO 528 7.0 528/617 不渗透膜；高亲合DNA标记；死细胞 染色；电泳prestain；氩-离子和He-Ne激光 甲醇 6 H2O; DMF 421 11 431/498 不渗透膜；A~T选择；高亲合DNA标记 甲醇 探针序号 溶解性 λmax/nm ε*103/（1mol-1*cm-1）　 (λex/λem)/nm 性能及应用 溶剂 10 H2O, DMF 352 40 352/461 渗透膜；A~T选择，小沟槽键合，选择键合dsDNA； 活细胞染色；细胞周期研究；染色体和细胞计数染色 水或 甲醇 11 H2O, DMF 350 45 350/461 渗透膜；A~T选择，小沟槽键合，活细胞染色；细胞周期研究；染色体和细胞计数染色 水或 甲醇 12 H2O, DMF 358 21 358/461 半渗透膜；A~T选择，细胞周期研究；染色体和细胞计数染色；支原体检测 水或 甲醇 13 H2O, 甲醇 358 20 358/461 同上 水或 甲醇 14 H2O, DMF 364 25 364/455 A~T选择，与色霉素一起用于染色体成譜带 水或 甲醇 探针序号 溶解性 λmax/nm ε*103/（1mol-1*cm-1） (λex/λem)/nm 性能及应用 溶剂 15(POPO-1) DMSO 434 92 434/456 不渗透膜; 高亲合DNA标记；死细胞 染色；染色体和细胞计数染色；电泳前染色 水或 甲醇 16(BOBO-1) DMSO 462 114 462/481 不渗透膜; 高亲合DNA标记；死细胞