核桃蛋白水解制降压肽课稿.doc

1前言 1.1研究目的和意义高血压是一种常见的心脑血管疾病，会引起心血管、大脑、肾脏的病变[1]。降压肽是一种ACE抑制剂，通常用于高血压患者的治疗[2]。目前，对高血压患者的治疗通常使用化学合成的药物，然而，这些合成药物有一些副作用,包括咳嗽和皮疹[3]。食源性降压肽来源于天然植物，无副作用，易被人体吸收[]。核桃?(核桃)?蛋白质的具有广阔应用前景的新产品和强化的好来源[]。核桃粕是核桃经过提取油后的副产物，含有9.65%蛋白质，提油后的核桃粕多数被用作饲料，资源造成了一定的浪费，酶解核桃粕蛋白制备肽可以促进的深加工，采用两种不同的蛋白酶共同作用水解蛋白，采用双酶复合水解可以增加蛋白酶的特异性催化位点[]，可以提高可溶性蛋白含量及功能性多肽的产量和转化率[]，并且增大了蛋白的水解度，也一定程度上增大了蛋白原料对肽的转化率，进而可以改善蛋白质水解液中功能性多肽的特性将两种蛋白酶分两步进行酶解，全面研究双酶分步酶解工艺制备降压活性肽的工艺及参数1.2降压肽的研究进展 日本是对食源性降血压肽研究最多的国家且已经有此类降血压肽的商品上市以其天然无毒的特性受到了广大消费者的信赖而我国在此项的研究才刚刚起步[]，目前临床上的高血压的药物治疗管有效可是也存在弊端如降压过度泌尿系统发生病变持续性咳嗽味觉失真和血管神经性水肿等而通过蛋白酶的水解获得的具有降血压活性的多肽不仅可以对高血压患者起到降血压的作用对身体体质没什么影响适合患者长期服用随着国民生活水平的提高人们的自我保健意识和安全意识也在逐渐加强这种降血压肽会逐渐被人们接受成为预防缓解和治疗高血压的一个有效手段材料与方法.1 材料和设备核桃粕，康福寿核桃油加工有限公司；2709碱性蛋白酶(Alcalase)购于北京博奥拓达科技有限公司；风味蛋白酶购于sigma公司；FAPGG，呋喃丙烯酰三肽，购于sigma公司；ACE，血管紧张素转换酶，购于sigma公司；正己烷、盐酸、浓硫酸、氢氧化钠等均为分析纯。试验用水均为去离子水。恒温数显水浴锅金坛市医疗仪器厂；PHS-3 C雷磁pH计上海精科；BS 2000 S电子天平北京赛多利斯科学仪器有限公司；FDU-1200冷冻干燥机北京四环科学仪器厂ELx 808酶仪 Thermo公司；SH 21-1磁力搅拌器上海梅颖浦仪表制造有限公司；上海。 →过60目筛→脱脂→提取核桃蛋白→碱性蛋白酶酶解条件的优化→.3 核桃脱脂粉的制备 核桃粕经粉碎后过60目筛，用正己烷以15(w/v)的料液比在磁力搅拌器上提取1h后进行抽滤，取滤渣重复用正己烷提取至滤液无色透明时收集滤渣，然后用恒温干燥箱烘干溶剂，置于冰箱4℃冷藏备用。 .4 核桃蛋白的提取 碱溶酸沉法提取蛋白。[9]的方法，略改。以购买的核桃脱脂粕为原料，将其烘干后粉碎，然后通过95%醇洗(1:10,(w/v))，过滤，把滤饼置恒温干燥箱烘干溶剂。然后用去离子水配制蛋白质溶液(1:26,(w/v))，调节蛋白液的pH值到11，置磁力搅拌器上53℃搅拌1.5h后7000r/min 25℃离心15min，取上清液，调节pH至4.5，搅拌1h7000r/min 25℃离心15min，水洗沉淀，调节pH至中性后冻干，置于冰箱4℃冷藏备用。水解蛋白酶的筛选表四种商业酶最适作用条件和酶活力Table 1 The optimum hydrolysis conditions and the enzymatic activity of four commercial enzymes 酶种类 最适pH 最适温度(℃) 酶活力(U/g) 碱性蛋白酶 8.5 7.1×104 中性蛋白酶 7.0 40 6.3×105 风味蛋白酶 6.5 50 2.0×104 木瓜蛋白酶 6.8 55 8.2×105 将上述的四种蛋白酶在各自的最适酶解条件下对蛋白进行解，ACE抑制率和水解度，，结果图： 图四种酶解液的ACE抑制率及其水解度的比较 Fig. Comparison the four kind of enzyme solution on ACE inhibition rate and Hydrolysis degree 由图可以得到，[9]。研究结果表明，对核桃蛋白的水解能力碱性蛋白酶明显高于风味蛋白酶风味蛋白酶高于中性蛋白酶和木瓜白酶风味蛋白酶杨越[]以葵花籽为原料酶法制备ACE抑制肽报道的结果比较相似。综合考虑选择碱性蛋白酶。表2.碱性蛋白酶和风味蛋白酶的最佳酶解工艺参数比较 Table2.The optimum technology of Alcalase and Flavourzyme 碱性蛋白酶 风味蛋白酶 酶解pH 8.5 6 酶解温度（℃） 5 50