实验2培养基制备和灭菌技术_基础生物学实验(安徽大学生复试用,生物生命科学)课稿.docVIP

实验二 培养基制备和灭菌技术 一、实验目的 1．学习一般培养基的制备方法。 2．掌握高压蒸汽灭菌技术，了解几种常用的灭菌方法。 二、实验原理 （一）培养基 培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工的方法配制而成的一种基质。它是微生物的生活环境，各种微生物对养分和培养基的物理、化学要求条件不一样，为了分离、培养、鉴定、保藏和研究不同种类的微生物，就应当根据它们的需要，配制合适的培养基。微生物在培养基上生长发育，必须在一定的最适酸碱度范围才能表现出它们最好的生命活动力。不同的微生物对酸碱度的要求不同，因此，我们在配制培养基时，必须调节培养基的pH值。 培养基的种类繁多，根据培养基的成分、物理性状不同，可分为天然培养基、合成培养基、半合成培养基、固体培养基、半固体培养基和液体培养基。 1．天然培养基:主要成分是复杂的天然有机物质配制而成，如马铃薯、玉米粉、豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨、血清等，这些复杂天然有机物质的成分不完全了解，每次所用的原料，其中各成分的数量也不恒定的天然有机物质配制成的培养基，如牛肉膏蛋白胨、马铃薯、麦芽汁培养基。它适用于生产上大规模培养微生物。 2．合成培养基:合成培养基是用化学成分完全了解的纯化合物药品配制而成的培养基，也称化学成分明确的培养基，例如高氏一号培养基、查氏培养基等。一般适用于在实验室范围内研究微生物的形态、代谢、分类鉴定、生物测定、菌种选育和遗传分析等工作。 3．半合成培养基:在以天然有机物作为微生物营养来源的同时，适当补充一些成分已知的化学药品所配制的培养基叫半合成培养基。大多数微生物都能在此种培养基上生长，因此，应用广泛，如马铃薯葡萄糖(蔗糖)培养基，大多数霉菌都生长良好。 4．固体培养基:在液体培养基中加入凝固剂即为固体培养基，常用凝固剂有洋菜、明胶、硅胶，硅胶用于配制自养微生物的固体培养基；对于其他多数微生物来讲，洋菜最为合适，一般加入1.5～2.5%即可凝固成固体，如牛肉膏蛋白胨培养基等。此培养基可供微生物的分离、鉴定、活菌计数、菌种保存等。 5．半固体培养基:在液体培养基中加入少量凝固剂即配成为半固体培养基，如加入0.2～0.7%洋菜作为凝固剂。用来观察细菌运动特征、菌种鉴定、菌种保存和噬菌体的效价测定等。 6．液体培养基：不加任何凝固剂配好后成为液体状态的培养基。如糖发酵液体培养基、蛋白胨水培养基等。常用于大规模的工业发酵生产、遗传学研究、生理代谢等基本理论的研究工作。 根据培养基的特殊用途可分为基础培养基、加富培养基、选择培养基和鉴别培养基。 (1)基础培养基：含有一般细菌生长繁殖需要的基本营养物质，常用的基础培养基是牛肉膏蛋白胨培养基，也是作为某些特殊培养基的基础成分。 (2)加富培养基：是在基础培养基中加入血、血清，动物、植物组织提取液，主要用于对培养某些微生物要求比较苛刻的营养。 (3)选择培养基 是根据某一类或某一种微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学条件的抗性而设计的培养基。一种是根据某些微生物对碳、氮源等营养的特殊要求所设计的选择性培养基，就可以分离到能分解某些物质的微生物。如以纤维素作唯一碳源的选择性培养基，可以分离到分解纤维素微生物；无氮培养基可以分离到固氮微生物。另一种是根据某些微生物对一些物理、化学因素的抗性而设计的培养基，最常用的是在培养基中加入某些化学物质，以抑制不需要的微生物的生长繁殖。如在分离放线菌时，在培养基中添加10%的酚或链霉素数滴可抑制细菌和霉菌的生长，又如分离霉菌的马丁氏（Martun）培养基。 (4)鉴别培养基 是在基础培养基中加入某种化合物或化学试剂，某种微生物在这种培养基上培养后，它所产生的某种代谢产物与某种化合物或化学试剂能发生某种明显的特征性反应，根据这一特征性反应可以将某种微生物与其他种微生物区别开来，如糖发酵培养基、伊红美蓝培养基等。 （二）灭菌 消毒与灭菌两者有不同的概念。消毒一般是指消灭病原菌和有害微生物的营养体而言，而不能杀死全部芽孢，因此，消毒只是一种常用的卫生措施；灭菌则是指杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子，因此，灭菌后的物品是无菌的。灭菌的方法很多，有加热、过滤、照射和化学药品等。 1．加热法：又分干热灭菌和湿热灭菌两种。 (1)干热灭菌：有火焰烧灼和热空气灭菌两种。火焰烧灼灭菌适用于接种环、接种针和金属用具（如镊子）等，无菌操作时的试管口和瓶口也在火焰上短暂烧灼灭菌。我们通常所说的干热灭菌是在电热干燥箱内灭菌，此法适用于玻璃器皿（如吸管和培养皿）等的灭菌，在热空气160～170℃下保温2小时进行灭菌。 (2)湿热灭菌：①高压蒸汽灭菌法。此法时将物品放在高压蒸汽灭菌锅内1.05kg/cm2（15磅/英寸2），121.3℃保持15～30分钟进行灭菌，时间的长短可根据灭菌物品种类和数量