2013微生物实验讲稿幻灯片.pptVIP

器材和试剂 1.菌种： 金黄色葡萄球菌 肺炎克雷伯菌 大肠埃希菌 铜绿假单胞菌 乙型溶血性链球菌 枯草芽孢杆菌 2.培养基： 营养肉汤、半固体培养基、琼脂平板、琼脂斜面 血琼脂平板、麦康凯琼脂平板。 3. 其它： 接种环、接种针、酒精灯等。 步骤和方法 1.接种工具 2.接种环境 3.接种方法→接种前首先检查培养基的外观，其次 在培养基上进行标识。 ① 倾注法 ②液体接种法 ③半固体接种法 ④斜面接种法 ⑤平板接种法 a 连续划线法 b 分区划线法 c 棋盘格划线法 d 涂抹法 e 自动接种仪接种法 4.细菌培养的方法 ① 需氧培养法 ② 厌氧培养法 ③ 二氧化碳培养法 ④ 微需氧培养法 5. 培养：将接种好的培养基置于35℃培养箱中孵 育18～24h，取出观察并进一步检验。 接种环图片 接种环（针）示意图 铂丝→镍丝 酒精灯使用方法 电子灭菌器 分区划线分离法及培养后菌落分布示意图 穿刺接种方法 斜面接种方法 液体培养基接种方法 实验内容 1.菌种： 金黄色葡萄球菌 肺炎克雷伯菌 大肠埃希菌 铜绿假单胞菌 乙型溶血性链球菌（A群链球菌） 枯草芽孢杆菌 2.接种方法 血平板→三分区划线，接种金黄色葡萄球菌 和大肠埃希菌。 营养琼脂平板→三分区划线，接种金葡和铜绿假单胞菌。 麦康凯平板→三分区划线，接种大肠、铜绿、金葡和A链。 斜面→连续划线（密而不重），接种铜绿假单胞菌。 半固体→穿刺（需一次进行），接种大肠埃希菌和肺克。 液体培养基→接种金葡、A群链球菌和枯草芽孢杆菌。 3.培养方法：需氧培养 4.达到目的：掌握各种接种方法及无菌操作要领， 树立和牢记无菌操作的意识。 实验三、细菌生长现象观察与 革兰染色 实验目的 1、掌握观察及描述细菌菌落的方法。 2、掌握细菌涂片的制作过程及革兰染色的原理 方法和细菌形态观察。 3、熟悉细菌在各种培养基上的生长现象及意义。 器材和试剂 1.菌种： 同实验二 培养基： 同实验二 试剂： 革兰染液、无菌生理盐水。 4.其它： 载玻片、显微镜、酒精灯等 步骤和方法 1、细菌生长现象的观察 1）固体培养基 a 平板培养基： 菌落描述：颜色、大小、表面、边缘、湿润程度 溶血现象、色素、特殊气味等。 b 斜面培养基：观察菌苔特征。 2) 液体培养基：混浊生长、沉淀生长 和表面生长。 3) 半固体培养基：观察细菌是否有动力。 2、细菌涂片的制作过程 涂片→→→干燥→→→固定 3、革兰染色的原理 1）细胞壁结构学说 2）细菌等电点学说 3）化学学说→→→核糖核酸镁盐 4、革兰染色的方法 初染→→→媒染→→→脱色→→→复染 一紫二碘三酒精 第四复红皆水冲 时间要看说明书 阴性菌红阳性紫 5、染色结果的观察：要求绘图。 6、影响染色结果的因素 1)操作因素 2)染液因素 3)细菌因素 菌落形态示意图 沙雷菌色素 麦康凯上发酵乳糖 麦康凯上不发酵乳糖 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 临床微生物学与检验 实验课程 陕西中医学院附属医院