ly1.1 DNA重组技术的基本工具幻灯片.pptVIP

限制酶在原核生物中作用： 切割外源DNA，使之失效，从而达到保护身的目的。 为什么限制酶不剪切自身的DNA？ 1、DNA分子中不具备这种限制酶的识别切割序列 2、或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。 5．下列属于基因运载体所必须具有的条件是 ①具有某些标志基因 ②具有环状的DNA分子 ③能够在宿主细胞内复制 ④具有1种或多种限制性内切酶切割位点 A. ①② B.③④ C. ①③④ D. ②④ C 6、下列不合适作为基因工程的受体细胞的是： A.大肠杆菌 B.硝化细菌 C.结核杆菌 D.乳酸杆菌 C 7、下表是外源基因插入位置（插入点有a、b、c），请根据表中提供细菌的生长情况，推测①②③三种重组后细菌的外源基因插入点，正确的一组是： 细菌在含青霉素培养基上生长情况 细菌在含四环素培养基上生长情况 ① 能生长 能生长 ② 能生长 不能生长 ③ 不能生长 能生长 A．①是c；②是b；③是a B．①是a和b；②是a；③是b C．①是a和b；②是b；③是a D．①是c；②是a；③是b A 基因工程： 基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,并通过体外DNA重组和转基因等技术,赋予生物以新的遗传特性,从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工，因此叫做DNA的重组技术。 注：基因工程能定向改造生物的遗传性状 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 实质（原理） 结果 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 (人工）基因重组 转基因抗虫棉 抗虫棉 普通棉 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 与运载体DNA拼接 导入 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？ 基因工程培育抗虫棉的关键步骤： 关键步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤二： 抗虫基因与运载体DNA连接 关键步骤三： 抗虫基因导入受体(棉花)细胞 1.1 DNA重组技术的基本工具： 1、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 2、DNA连接酶—— “分子缝合针” 3、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 1、限制性核酸内切酶 2 特点： 识别双链DNA分子中特定核苷酸序列，在特定的位点切割（特异性）。 1 分布： 主要在原核生物中 限制酶所识别的序列有什么特点？ 限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线,中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 限制酶识别序列的中轴线 3 结果： 打开磷酸二酯键，产生黏性末端或平末端。 磷酸二酯键 G 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 A 什么叫黏性末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 EcoR Ⅰ 什么叫平末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 1.黏性末端和平末端都由限制酶进行切割产生，下列说法正确的是（ ） A.切割这两种末端可以用同一种限制酶 B.切割这两种末端需不同的限制酶 C.这两种末端可以相互拼接 D.拼接时，限制酶参与拼接过程 B 二、 “分子缝合针” —— DNA连接酶 1、种类： 2、作用部位： E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 磷酸二酯键 DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子就形成了。 如果把两种不同来源的DNA的用同一种限制酶（如EcoRⅠ）来切割，会怎样呢？ 会产生互补的黏性末端，然后让两者的黏性末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。 ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… EcoRⅠ ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… 不同来源的DNA片段混合 将不同种来源的DNA片段连接起来 生物A基因片段 生物B基因片段 ……G　　AATTC…… ……