发酵分析实验讲义.docVIP

实验一 原料中粗淀粉的测定 (兰·爱农法) 粮食是含淀粉量较多的原料，一般采用酸水解法测定。由于此法不仅能水解多糖类，而且也能把半纤维，多缩戊糖，果胶质等水解为葡萄糖和戊糖，所以测定结果为淀粉含量。 一、实验目的 1、掌握兰·爱农法测定还原糖的基本原理及方法 2、训练学生在热源上进行滴定操作 二、实验原理 1、淀粉水解 　 　　　　 淀粉 　　　　 葡萄糖 2、斐林试剂 ①、 ②、 3、氧化还原反应 、 CHO COOK CHO (CHOH)4 + 6 Cu +6H2O = CHO CH2OH COONa COOH COOK CHOH (CHOH)3 + 6 +3Cu2O↓+H2CO3 CHOH CH2OH COONa 4、滴定终点 CHO N (CHOH)4 + (CH3)2N S N＋(CH3)2CL+H2O CH2OH 氧化型次甲基兰(兰色) H COOH N (CHOH)4 + (CH3)2N S N(CH3)2+HCL CH2OH 葡萄糖酸 还原型(无色) 三、仪器、试剂 1、5%盐酸溶液 2、20%氢氧化钠溶液 3、斐林甲液：称取69.278g硫酸铜(CuSO4.5H2O)，加H2O溶解并稀释至1000毫升过滤，储存棕色瓶中。 4、斐林乙液：称取346g酒石酸钾钠和100gNaOH，加水溶解并稀释至1000毫升。 5、1%次甲基兰溶液：称取1g次甲基兰，加100mL水，贮存于棕色瓶中。 6、0·4%标准葡萄糖溶液：准确称取4g无水葡萄糖(预先于100-1050C烘干)，用水溶解，加5毫升浓盐酸，用水定容到1000毫升。 配制时注意： 盐酸36%，葡萄糖含一个结晶水，费林甲液一定过滤 四、步骤 1、试样水解 精确称取样品1.5g(用10-4天平，称样原则：样液与标液浓度接近)，置入500毫升锥形瓶中，加5%盐酸溶液100毫升，安上回液冷凝管。 在电炉上加热至沸腾，保持15分钟，取下迅速冷却，加入20%氢氧化钠溶液中和至pH6.5-7,将溶液过滤于250毫升容量瓶中，再将锥形瓶内的残渣用蒸馏水冲洗2-3次，过滤、定容、滤液为供检糖液。 2、斐林试剂的标定 准确吸取斐林试剂甲、乙液各5毫升，置于250毫升锥形瓶中，加20毫升水，并从滴定管中加入13毫升0.4%标准葡萄糖溶液，摇匀，于电炉上加热至沸腾(两分钟内沸腾)，并保持微沸两分钟，加2滴1%次甲基兰溶液，继续用0.4%标准葡萄糖溶液以每二秒一滴的速度滴定至兰色消失，此滴定需在1分钟内完成，总耗量为V0毫升，平行操作3次，F=C·V0 甲液必须取准。取甲、乙液分别用两只移液管，若生成Cu(OH)2沉淀，用HCl洗(专用移液管，用后放回原瓶) 先滴定，一次性加入13mL，留1mL左右后滴定，后滴定是用碱式滴定管一滴一滴滴加的，注意一次性读总数。 注意终点观察，蓝色消失，瓶内红色CuO2↓,滴定速度一定要均匀、慢，不要滴定过量，碱式滴定管尖端小管内注意不能产生气泡。 3、样品溶液预测 吸取斐林试剂甲、乙液各5毫升，置于250毫升锥形瓶中，加20毫升水，加热使其在