课件5：凯普地中海贫血基因检测试剂盒及临床应用.ppt

凯普地中海贫血基因检测 试剂盒及临床应用 王冰冰 Ph.D. 广东凯普生物科技股份有限公司 地中海贫血 地中海贫血（ Thalassemia ），简称地贫，世界上发病率最高、危害性最大的单基因遗传性疾病，主要分为α-地贫和β-地贫。 我国以长江以南各省发病率高，多见于广东、广西、海南、福建、云南、贵州、四川 等地区。 地中海贫血 地区 携带率（%） α地贫 β地贫 广东 8.53 2.54 广西 17.55 6.43 海南（汉族） 12.96 2.7 海南（黎族） 56.72 11.2 四川 1.92 2.18 贵州 4.20 1.10 云南 3.46 7.27 香港 5 3.4 台湾 5.02 3.41 中国南方α和β地贫的人群携带率 地中海贫血 若夫妻一方为地中海型贫血的带因者，每次怀孕，其子女有1/2的机会为正常，1/2的机会为带因者。 若夫妻都为地中海型贫血的带因者，每次怀孕，其子女有1/4的机会为正常，1/2的机会为带因者，另1/4的机会为重型地中海贫血患者。 地中海贫血 基因类型 临床类型 症状 αα/αα 正常人 -α/αα或αTα/αα 静止型 无症状 --/αα、-α/αTα或ααT/ααT或-α/-α 轻型 （标准型） 轻度贫血 --/-α或--/ααT 血红蛋白H病 溶血性贫血 --/-- Hb Bart’s胎儿水肿综合症 胎儿水肿 - a3.7 - a4.2 a2Ta1 - - 地中海贫血 基因类型 基因产物 临床类型 临床表现 β+/βA、β0/βA 能合成适量的β链 静止性及轻型β地贫 贫血不明显或轻度贫血 β+/ δβ+ 变异型纯合子 β链部分合成 中间型β地贫 介于重型和轻型之间（不需输血） β+/β+、β0/β0、 β+/β0 β链几乎不能合成 γ链合成相对增加 Hb F和Hb A2增加 重型β地贫 地中海贫血面容 溶血性贫血（需输血） β+ β0 地中海贫血 β地中海贫血的常见突变类型 凯普地中海贫血核酸检测试剂盒 产品介绍 名称 α-和β-地中海贫血基因检测试剂盒（PCR+膜杂交法） 规格 30人份/盒 产品性能 本试剂盒用于可以快速准确诊断中国人常见的3种缺失型α-地中海贫血（--SEA、-α3.7 和 -α4.2）和3种突变型（CS、QS、WS）及β-地中海贫血15个突变位点（16种突变类型）, 分别为：【IVS-II-654(C-T)、-28(A-G)、-29(A-G)、CD14/15（+G）、CD17(A-T)、CD27/28（+C）、βE(G-A) 、CD41/42 (-TTCT)、CD43(G-T)、CD71/72(+A)、IVS-I-1(G-T, G-A)、 IVS-I-5(G-C)、Cap(-AAAC)、Int（T-G）、CD31(-C)】。 试剂盒组成 PCR扩增试剂盒组成（30人份/盒，-20℃储存） 规格(管) α-地贫PCR MIX 1305μl α-地贫DNA聚合酶（5U/ul） 15μl β-地贫PCR MIX 1395μl β-地贫DNA聚合酶 （5U/ul） 12μl UNG酶（1U/ul） 3μl 杂交试剂盒组成（30人份/盒，4℃储存） 规格(管) 杂交液 120ml WB1 100ml 封阻液 32ml 酶标液 16ml 溶液A 100ml 杂交膜 30人份 NBT/BCIP 16ml 产品应用 EDTA或枸橼酸钠抗凝全血样本 羊水样本 滤纸血斑（采集卡）样本 绒毛膜样本 设计原理--α地贫 跨越断点PCR方法（Gap-PCR） 以人基因组DNA为模板，将引物分别设计在--SEA、-α4.2和-α3.7的公共缺失区域断裂点附近上游（正向引物）和下游（反向引物），利用PCR的扩增片断长度限制（标准PCR只能扩增2kb-3kb以内的片断），扩增得到α缺失型基因，其中，a2/a2-R可扩增NP、CSN、QSN、WSN。 α-地贫引物设计位置 设计原理--α地贫 CD122(CACCAG,or HisGln) α-地贫基因缺失和点突变位置示意图 设计原理--β地贫 PCR扩增β突变型基因 在β基因内设计两对PCR通用引物，以人基因组DNA为模板，扩增包含16个突变点在内的两段基因序列，同特异性探针杂交以检测突变种类。 β-地贫引物设计位置 设计原理-- DNA提取 血液基因组DNA提取原理通过破裂细胞膜、核膜以释放DNA，在高浓度盐溶液中，核酸吸附到硅类介质表面，并在低盐溶液中洗脱下来，从而达到提取纯化目的。 各溶液的作用 溶液L和蛋白酶K：裂解细胞膜及核膜，变性蛋白质等大分子 无水乙