第五章酶化学-2011讲解.ppt

酶的催化特性3——酶常需要辅因子 （4）电子传递中间体 许多氧化-还原酶中都含有铜或铁离子，它们作为酶的辅助因子起着传递电子的功能。 （5）金属离子催化作用 金属离子可以和水分子的OH-结合，使水显示出更大的亲核催化性能。 反应速率=碰撞频率×能量因素×概率因素 概率因素：是指碰撞位置要正确，有效碰撞的概率 能量因素：即使发生碰撞，碰撞方向正确，也需要一定能量克服原有键能，达到过渡态。 浓度↑： 碰撞频率↑ 温度↑： 动能↑ 碰撞频率↑能量↑ 酶的催化作用是在哪一环节呢？ 酶的催化作用依赖于： 降低反应的活化能 改变反应历程降低反应活化能—酸碱催化和共价催化 改变酶催化中心催化能力而改变活化能—多元催化-继电网 改变底物状态而改变活化能—电子张力 改变酶和底物作用环境而使反应活化能降低-“微环境” 增加有效碰撞频率—邻 基效应和定向效应 第四节 酶的动力学 动力学简介 酶反应速度测定（动力学基础） 酶反应动力学（底物） 抑制作用及其动力学（抑制剂） 其它因素对酶动力学影响 4.1　动力学简介 化学动力学的基本任务： （１）确定化学反应的速度以及各种因素（如浓度、温度、压力、催化剂等）对反应速度的影响，提供选择适当的反应条件，使反应按所希望的速度进行的有用信息。 （２）研究化学反应的机理，即研究反应物转变为产物所经历的途径。 几个动力学概念 反应物分子在碰撞中一步转化为生成物分子的反应称为基元反应（Elementary reaction）。 绝大多数化学反应都不是基元反应，而往往是要经过若干个基元反应才能最后转化为产物。这些基元反应代表了反应所经过的途经。 几个动力学概念 若基元反应为： aA + bB　　cC + dD d[A]／dt= k[A]a[B]b 　即基元反应的速度与反应物浓度的乘积成正比，而各反应物浓度项的方次等于反应式中相应物质的系数。基元反应的这个规律称为质量作用定律。 上式中各反应物浓度项的次方之和，如a+b=m，m被定义为该反应的级数。 反应级数由实验确定。 几个动力学概念 酶动力学 酶动力学研究各种因素对酶反应速度影响 影响酶反应速度的因素有： 　底物浓度；酶浓度；抑制剂；温度；pH等 4.2　酶反应速度测定（动力学基础） 反应速度用单位时间、单位体积中底物的减少量或产物的增加量表示（一般用产物增加量，因为产物由无到有，容易检测到） 测初速度原因在于 　（１）酶在初始阶段不受产物和副反应产物分子的抑制，反应出一定量酶的催化性能； 　（２）长时间催化酶还可能因为温度原因失活，反应不出一定量酶的催化性能； 　（３）同时底物浓度要控制在零级反应范围内，才能反应出一定量酶的催化性能（排除了底物浓度对酶催化反应速度影响，只反映酶的催化能力），反应后阶段底物浓度变化过大，反应速率不能控制在零级反应阶段． 初速度测定注意事项 测定过程 底物　最适底物保证催化速度快，信号容易检测，合适底物浓度（过量，大于5Km）． 温度和pH等条件也该最适合条件 给定预热时间，使反应温度得到控制；注意控制反应过程中pH值 混匀过程迅速，使传递时间得到控制 合适的终止酶反应方法有利于计算反应时间 精确的确定剩余底物浓度或反应产物浓度 酶的活力往往用酶反应初速度来表征 酶活单位U：在一定条件下，一定时间 （s,min,h s,min,h）内将一定量（mg, mg,μg, g,μmol mol）的底物转化为产物所需的酶量。（浓度/时间）　　　　　（活力指标） 酶的比活力：用每mg蛋白质所含酶活力单位 　数，比活愈大，纯度愈高。　（纯度指标） 4.3　酶反应动力学（底物） 研究简单酶催化反应所得酶动力学图形 (二) 酶动力学方程推导 过渡态机理的提出 (二) 酶动力学方程推导 ——推导的假设 中间络合物快速平衡学说，提出三点假设： （１）测定的是反应初速度，初速度时底物消耗少，约占5%内，这时所在时间内，产物生成极少，P + E ES 可以不考虑 （２）[S][E],反应消耗的底物浓度[S]可忽略不计算 （３）反应生成中间物[ES]快速达到平衡，不平衡的动力学由稳态前动力学研究． (二) 酶动力学方程推导 ——推导过程 (二) 酶动力学方程推导 ——推导过程 (三) 米氏方程常数的意义 (1) Km 定义 Km等于酶促反应速度为最大反应速度一半 时的底物浓度。 意义： Km可近似表示酶对底物的亲和力（专一性结合能力）；（ Km愈小，酶对底物的亲和力愈大） Km是酶的特征性常数之一(一定底物，温度，pH条件下）； 同一酶对于不同底物有不同的Km值,可用于识别天然底物。（Km最小者，为酶的天然底物） (三) 米氏方程