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基因工程的基本操作程序
DNA的基本单位--核苷酸 将目的基因导入动物细胞——显微注射技术 脱氧核苷酸 核糖核苷酸 dNMP dAMP dGMP dCMP dTMP NMP AMP GMP CMP UMP 核苷酸的衍生物 NDP 、 NTP dNDP 、 dNTP 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 3’ DNA复制的条件: 模板DNA、(dNTP)、解旋酶、 引物酶、DNA聚合酶、DNA连接酶 5’ 3’ DNA聚合酶 DNA连接酶 引物 高温变性 中温延伸 低温复性 PCR 加热变性 退火复性 延伸 PCR循环 PCR技术 PCR反应体系中目的基因成指数(2n)形式扩增 1个DNA分子进行PCR扩增,循环4次,理论上至少需要几个引物? 细胞内复制 .VS. PCR扩增 DNA母链 4种 dNTP Taq DNA聚合酶 引物(2个snDNA) 温度控制 1)模板: 2)原料: 3)酶: DNA母链 4种 dNTP 解旋酶 DNA聚合酶 引物酶 DNA连接酶 DNA增殖 4)特点: 半保留复制 边解旋边复制 (不用DNA连接酶) 半保留复制 全解旋再复制 PCR扩增仪 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 三、将目的基因导入受体细胞——转化 目的基因进入_________内,并且在受体细胞内维持_____和_____的过程。 受体细胞 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 ——显微注射技术 ——感受态法 受体细胞 稳定 表达 农杆菌转化法 (1)农杆菌介绍 (2)原理及适用范围 适用于 双子叶植物 裸子植物 双子叶植物-网状脉 单子叶植物-平行脉 种子植物 裸子植物 被子植物 双子叶植物 单子叶植物 : 松、柏、杉… :花生、大豆、棉花… : 水稻、小麦、玉米… 双子叶植物-网状脉 单子叶植物-平行脉 农杆菌转化法 适用于 单子叶植物 基因枪法 胚珠 花药 花丝 柱头 花柱 子房壁 子房 雄蕊 雌蕊 花粉管通道法 适用于 被子植物 将目的基因导入微生物细胞 原核生物的优点:繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少,故早期常作为受体细胞。 大肠杆菌细胞 用Ca2+处理 感受态细胞 重组表达载体DNA 溶于缓冲液 混合 转入 四、目的基因的表达和检测 接种实验 抗原-抗体杂交法 DNA-RNA分子杂交法 DNA分子杂交法 受体是否具有转基因特征 个体水平 目的基因是否翻译 目的基因是否转录 目的基因是否导入 分子水平 方法 检测对象 基因探针: 基因探针就是一段与目的基因或DNA互补的特异核苷酸序列。它包括整个基因,或基因的一部分;可以是DNA本身,也可以是由之转录而来的RNA。 DNA分子杂交 1)有关基因工程的叙述中,错误的是( ) A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、 限制性内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、 人工合成目的基因不用限制性内切酶 A 练习 * 现代生物科技专题 1.2 基因工程的基本 操 作 程 序 基因工程基本操作的四个步骤 获取目的基因 构建基因表达载体 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 什么叫基因? 基因--有遗传效应的DNA片段。 什么叫遗传效应? 遗传效应-- 能转录为mRNA,继而翻译为蛋白质; 能转录为核糖体RNA; 能转录为转运RNA。 基因工程的目的基因-- 从供体转移到受体的编码蛋白质的基因。 与生物抗逆性相关的基因 与优良品质相关的基因 与生物药物和保健品相关的基因 与毒物降解相关的基因 与工业所需酶相关的基因 具有调控作用的因子 …… 1、获取目的基因的方法有哪些? 2、什么叫基因文库,它包括哪些种类? 3、用PCR技术扩增基因需要哪些原料? 1、人工合成 2、从基因文库中获取 3、利用PCR技术扩增 (基因比较小,序列已知) 基因文库 基因组文库 部分基因文库--如:cDNA文库 一、目的基因的获取 基因文库的构建 提取某种生物的全部DNA 用适当的限制酶切 一定大小的DNA片段 将DNA片段与载体连接 导入受体菌中储存 基因组文库 某种生物的mRNA 单链互补DNA 双链cDNA片段 导入受体菌中储存 与载体连接 cDNA文库 逆转录 1、构建基因组DNA文库时,首先应分离细胞的 A、染色体DNA?? B、线粒体DNA C、总mRNA?? D、tRNA 2、目的基因可从基因文库中获得,下列有关基因文库的描述正确的是 A、某生物的全套基因就是一个基因文库 B、将含有某种生物不同的许多DNA片段,导入某个生物 体内,则这个生物就是一个基因文库 C、含有一种生物所有基因的基因文库叫做基因组文库 D、含有一种生物的一部分基因的基因
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