中文说明书鸡传染性贫血病的抗体检测试剂盒ChickenanemiaVirus.docVIP

中文说明书 鸡传染性贫血病的抗体检测试剂盒 Chicken anemia Virus AntCAVody Test Kit(CAV) 概述和用途 鸡传染性贫血病病毒（CAV）是一种能导致雏鸡严重的免疫抑制的病原体。该病毒通常在1-5周龄的雏鸡群中水平传播；也能通过感染鸡群的粪便垂直传播。垂直传播的鸡群通常能导致2-3周龄的雏鸡群高达60%以上的死亡率。CAV能导致易感鸡群发生明显的再生障碍性贫血、皮下和肌肉出血、骨髓发育不良、坏疽性皮炎和所有的淋巴器官萎缩。 鸡传染性贫血病病毒感染通常用病原分离和用酶联免疫吸附实验（ELISA）、间接免疫荧光实验(IFA)或病毒中和试验(VN)检测血清中CAV抗体等血清学方法来进行诊断。IFA和VN实验需要将病毒进行传代，使大量的血清学实验变得更加繁琐；而ELISA方法不需要病毒传代，相对于其他的方法具有几个明显的优点。ELISA方法是自动化系统设计，不需要借助于显微镜检查，就能比IFA普遍敏感。这些优点使得ELISA方法更加适合大量的血清样品检测，以及鸡群的CAV的血清流行病学的调查。 本试剂盒适用于雏鸡CAV母源抗体的检测和SPF鸡群CAV抗体的监测。 原理 本试剂盒的设计用于检测鸡血清中鸡传染性贫血病病毒（CAV）抗体相对水平。本试剂盒将鸡传染性贫血病病毒（CAV）抗原包被微孔，待检血清加入包被微孔后的孵育阶段，血清中的特异性抗CAV抗体和包被的CAV抗原发生反应，形成抗原-抗体复合物，洗涤液去除未反应的多余抗体，加入亲和纯化的过氧化物酶标记的酶标抗体，酶标抗体与吸附于包被抗原的抗体结合；孵育后，洗涤去除未结合的酶标抗体；加入酶底物显色。颜色反应与待检血清中CAV抗体的量直接相关。 90个待检样品所需试剂 A）1块包被CAV抗原的酶标板 B）10ulCAV阳性对照血清 C）10ul阴性对照血清 D）100ul山羊抗鸡酶标二抗IgG（H+L）酶标记物 E）40ml样品稀释液 F）10ml氢化ABTS底物溶液 G）2.3ml 5倍浓缩的终止液，用含有5%的SDS的二蒸水或去离子水作1:5稀释 H）15ml 20倍浓缩的洗涤液，用二蒸水或去离子水作1:20倍稀释。 注意：所有的试剂必须在2-7℃保存，不能冻存。 所需器材 a) 高精度移液器(如1-20ul移液器) b）0.2ml,1.0ml和5.0ml移液器 c） 8或12道移液器（或移液装置） d） 2个量筒（50ml） e）1ml或5ml硅酸玻璃试管 f）96孔空板 g）实验室级水（双蒸水或去离子水） h）配有405-410nm波长滤光片的96孔酶标仪 i）洗板机。 注意事项 A)、所有的试剂和样品都要视为生物安全材料处理。 B）、谨防试剂溅入皮肤和眼睛，一旦溅入，立即用凉水冲洗干净。 C）、洗液，对照血清，检测板，检测样品和其它检测试剂必须用漂白剂或强氧化剂作无害化处理。 D）、特别注意，所有试剂不要被血清和细菌污染。 E）、每块检查板都有湿度显示，如果显示出粉红色，板则需经处理；清理（漂白剂清洗）或无害化处理。 F）、过期的试剂盒不要使用。 G）、好想获得好的实验结果，必须遵守以下实验操作规则。 所有盒内的试剂需在2~7℃保存；开始实验前，所有检测试剂必须回温至室温（21℃-24℃）！ 样品采集。 对于鸡群血清学的常规检测，建议每个鸡群固定时间（如每隔4周）进行检测，每次随机采集至少30份样品。要保证实验结果的可靠性，血清样品必须正确地采集、血清分离和保存（4℃最多4天或-20℃长期保存）。 试剂盒待检血清稀释步骤 试剂 稀释用液体 稀释倍数 稀释方案 备 注 阳性对照血清 样品稀释液 1：100 10ul+90ul；10ul+90ul 阴性对照血清 样品稀释液 1：100 10ul+90ul；10ul+90ul 待检血清 样品稀释液 1：100 10ul+90ul；10ul+90ul 洗涤液 实验室用水 1：20 20ml+380ml 一块板用 酶标抗体 样品稀释液 1：100 0.1ml+9.9ml 一块板用 终止液 实验室用水 1：5 2.5ml+10ml 一块板用 注意：5倍终止液保存时可能会产生白色固体，这并不影响产品质量。可以在室温或37℃下溶解后使用。 操作步骤 A）取出一块96孔待检样品稀释板（做好标记），每孔加入90ul血清样品稀释液，按图示1所示设置样品和对照的位置分别加入10ul阳性对照血清（+孔）、阴性对照血清（—孔）、待检血清（数字孔），充分混匀；室温平衡5分钟。（注意每个样品必须换吸头） 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A ㈩ ㈠ ㈩ (1) (2) (3) (4) (5) (6) (7) (8) (9) B (10) (11)