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液相色谱 分离原理 溶于流动相中的各组分经过固定相时，由于与固定相发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。 发展简况 色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。 液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法。 于60年代后期迅速发展起来的高效液相色谱法，它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相。 HPLC的特点 高压——压力可达150-300 Kg/cm2。色 谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上。 高速——流速为0.1-10.0 ml/min。 高效——可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。 高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。 HPLC与经典液相色谱的优点 速度快——通常分析一个样品在15-30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。 分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。 灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。 柱子可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。 样品量少，容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。 液相色谱法分类 液固色谱法 液液色谱法 排阻色谱法 离子交换色谱法 手性色谱 液固色谱法 使用固体吸附剂，被分离组分在色谱柱上分离原理是根据固定相对组分吸附力大小不同而分离。分离过程是一个吸附－解吸附的平衡过程。常用的吸附剂为硅胶或氧化铝，粒度5-10μm。适用于分离分子量200-1000的组分，大多数用于非离子型化合物，常用于分离同分异构体。 液液色谱法 使用将特定的液态物质涂于担体表面，或化学键合于担体表面而形成的固定相，分离原理是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离。分离过程是一个分配平衡过程。 排阻色谱法 固定相是有一定孔径的多孔性填料，流动相是可以溶解样品的溶剂。小分子量的化合物可以进入孔中，滞留时间长；大分子量的化合物不能进入孔中，直接随流动相流出。它利用分子筛对分子量大小不同的各组分排阻能力的差异而完成分离。常用于分离高分子化合物，如组织提取物、多肽、蛋白质、核酸等。 简介 原理 固定相 流动相 早在古希腊 时期人们就会用 特定的黏土纯化 海水.算是比较 早的离子交换法. 这些黏土主要是 沸石. 原理 Donnan平衡 A——分析物的离子 B——反离子 R——离子交换剂 X，Y——离子带电荷数 固定相 离子交换剂（Ion Exchanger）也称为离子 交换树脂（Resin），因为早期的人工合成离 子交换剂是由酚醛树脂做成的。 现在的离子交换剂有两大类： 聚合物交换剂 硅胶键合相 聚合物交换剂 交联聚合物型交换剂主要 是苯乙烯和二乙烯苯共聚 物，交联后成为透明的固 体小球。 硅胶键合相 此类离子交换剂以硅胶键合相为基础。 但硅胶键合的主要缺点是：容剂使用的pH值受到限制。 流动相 流动相即洗脱液。他的选择对离子交换色谱过程溶质的保留和选择性有很大的影响。 离子交换的过程，样品组分和交换剂上可交换基都必须电离，成为离子态。 流动相最主要的选择性参数——pH值 交换剂的交换容量在一定的pH值范围内存在。超出这个范围，交换容量急剧下降，失去实用性。 简介 双柱色谱法 应用 简介 离子色谱法是 1975年H.Small 等人以离子交换 为基础提出的一 种离子的分离检 测新方法。 双柱离子色谱 膜分离示意图 应用 离子色谱法作为一种常规方法普遍应用于环境，水质，食品检测等各个方面。并形成了现行的一套完整的国家标准监测方法。 手性色谱 Chirality 二十世纪 50 年代中期 ,臭名昭著的“反应停”（Thalidomide,沙利度胺）作为镇静剂用于消除孕妇早期妊娠反应 ,但不久就发现服用此药的孕妇生出的婴儿出现畸形 ,经研究发现具有镇静作用的是（R）-2对映体 ,而致畸作用是由（S）- 2对映体引起的。因此必须把具有手性的药物的另一异构体看