食品卫生四霉菌和酵母沙门氏菌检测.pptVIP

实验四 霉菌和酵母计数 沙门氏菌检验 一、实验目的 1.了解和学习食品中霉菌和酵母、沙门氏菌的测定原理和意义。 2.学习和掌握食品中霉菌和酵母计数的方法。 3.学习和掌握食品中沙门氏菌的检验方法。 二、实验原理 霉菌、酵母菌在自然界广泛存在，可以通过生产的各个环节污染食品，引起食品腐败，尤其是某些霉菌的有毒代谢产物还能引起各种急性或慢性中毒，危害人类。用稀释平板法进行计数。 沙门氏菌分布广，如果食品受到沙门氏菌污染，一旦条件适宜，沙门氏菌就会迅速的生长繁殖，当菌数在食品中达到一定数量，被消费者食用后就会造成食物中毒，危害人的身体健康，甚至危及生命。 沙门氏菌检验： 前增菌和增菌→平板分离→生化试验→血清学试验 沙门氏菌广泛存在于 动物肠道、内脏中 引起中毒的主要是 动物源性食品 中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验GB 4789.4-2003 冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品 鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品 前增菌法 25g＋BPW225mL 36 ℃ ± 1 ℃ 一般4h，干蛋品18h～24h 10mL＋MM （或TTB）100mL 10mL＋SC100mL 直接增菌法 25g＋灭菌生理盐水25mL 检样匀液25mL ＋MM （或TTB）100mL 检样匀液25mL ＋SC100mL BS DHL（或HE、WS、SS） TSI（排除A/A H2S－结果 ），靛基质，尿素，KCN，赖氨酸 H2S＋ 靛－ 尿－KCN－ 赖＋（或一项不符） 沙门氏菌血清学试验 甘露醇 山梨醇 H2S＋ 靛＋ 尿－ KCN－ 赖＋ H2S－ 靛－ 尿－ KCN－ 赖＋/－ 非如左述的各种反应结果 沙门氏菌血清学试验 ONPG － 沙门氏菌 非沙门氏菌 42 ℃ 18h～24h 36 ℃ ± 1 ℃ 18h～24h 42 ℃ 18h～24h 36 ℃ ± 1 ℃ 18h～24h 36 ℃ ± 1 ℃ 40h～48h 36 ℃ ± 1 ℃ 18h～24h 三、实验器材（每组的量） 1.霉菌和酵母计数 （1）培养基：孟加拉红培养基（临用倒平板） 1瓶 （2）材料： 225ml无菌水三角瓶 1瓶 灭菌平皿 6（或5）付 1ml灭菌吸管 4支 9ml无菌水试管 3支 （灭菌称量纸：1张/组,灭菌镊子：1把/组） 2.沙门氏菌检验 （1）培养基：四硫磺酸钠煌绿增菌（TTB） 1瓶 DHL琼脂培养基（临用倒平板） 1瓶 三糖铁高层斜面 6（或5）支 （2）材料： 25ml无菌生理盐水三角瓶 1瓶 灭菌平皿 6（或5）付 100(或50)ml灭菌量筒 1个 （碘溶液、0.1%煌绿溶液、 2ml及1ml吸管：全班共用） （灭菌称量纸：1张/组，灭菌镊子：1把/组） 四、实验步骤 （一）第一次实验 1.霉菌和酵母计数 ①秤25g蛋糕+225无菌水(10-1)。可用均质器混匀 ②做10-2 、10-3、10-4稀释液，移1ml稀释液于灭菌平皿（事先在皿底做好标记）内，每个稀释度做两个平皿。 ③将已融化并凉至45℃左右的孟加拉红培养基注入平皿约15ml，并立即旋摇平皿使混合均匀。倒置于25℃ -28℃温箱内培养5d。 2.沙门氏菌检验 ①秤25g已均质新鲜鸡皮+25ml灭菌生理盐水，快速混匀器混匀。 ②每瓶（100ml）四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）+2ml碘溶液+1ml0.1%煌绿溶液。 ③量取25ml样品液+ TTB100ml，混匀，42℃培养18h-24h （二）第二次实验 沙门氏菌检验 ①融化、倒6（或5）块平板（DHL琼脂培养基） ②取一环TTB增菌液，划线接种于DHL琼脂平板 ③倒置于36±1℃培养18—24小时 （三）第三次实验 沙门氏菌检验 ①挑取DHL琼脂平板上数个可疑菌落，分别穿刺并划线接种于三糖铁（TSI）高层斜面（每人接一支） ②36±1℃培养18—24小时 沙门氏菌各群在各种选择性琼脂平板上的菌落特征 选择性琼脂平板 沙门氏菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ 沙门氏菌Ⅲ（即亚利桑那菌） 亚硫酸铋琼脂(BS） 产硫化氢菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周