一阶导数紫外光谱法测定人血浆中地西泮的血药浓度.docVIP

一阶导数紫外光谱法测定人血浆中地西泮的血药浓度 　　[摘要] 目的 建立测定人血浆中地西泮浓度的一阶导数分光光度法，为临床应用提供技术参考。 方法 采用一阶导数光谱法在240.0 nm波长处测定人血浆中地西泮浓度。 结果 地西泮在5.35～31.85 μg/mL范围呈良好线性关系；其回归方程为D=1.241×10-3C+3.0706×10-4（r=0.9979）；平均回收率为100.85%，RSD=1.88%（n=6）。 结论 该法操作简单，测定结果准确，适用于地西泮血药浓度的监测。 　　[关键词] 地西泮；血药浓度；一阶导数光谱法；治疗药物监测 　　[中图分类号] R927.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）07（b）-0016-04 　　地西泮（Diazepam）是临床上常用的镇静、催眠、抗惊厥药，在体内主要经肝脏细胞色素P450酶作用进行氧化代谢，具有遗传多态性和东西方人种之间的差异，临床上地西泮常用于控制肌痉挛和抽搐，如破伤风、癫痫发作、局部麻醉等，大剂量可引起外周神经肌肉阻断、呼吸抑制等不良反应，严重者可导致死亡[1]。该药物不但临床应用广泛，而且也是急诊药物中毒和自杀患者的常服药物。 　　此类药物在中毒药物中居首位，是因为地西泮药代学参数个体差异明显、治疗指数范围小，药物过量的典型表现有差异，而且药物中毒的发生和严重的程度与血药浓度呈正相关[2]，因此监测其血药浓度对临床治疗和中毒抢救均有重要意义。目前，对地西泮血药浓度检测的研究报道多为高效液相色谱法[3-5]，紫外导数光谱法检测地西泮血药浓度未见报道，本文建立了简便、快速、准确地测定血浆中地西泮浓度的新方法――紫外导数光谱法，为地西泮的血药浓度监测与药动学研究提供了新的分析手段。 　　1 仪器与试药 　　仪器MV-1201型双光束紫外可见分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）；BP-21lD型电子天平（德国 SARTORIMS公司）；超声波发生器（上海SBS2200）；地西泮化学对照品（中国药品生物制品检定所提供）；水为超纯水；甲醇（分析纯）；纯化水由广西壮族自治区北海市人民医院（以下简称“我院”）检验科提供；血浆由我院输血科提供。 　　2 方法与结果 　　2.1 测定条件及吸收光谱的选择 　　2.1.1 溶液的制备 　　2.1.1.1 血浆样品溶液的制备 将地西泮对照品适量在105℃下，干燥至恒重，精密称取10.61 mg，置于100 mL容量瓶中，加入甲醇适量，振荡2～3 min，加甲醇试剂至刻度，制得地西泮贮备溶液。精密量取地西泮贮备溶液2 mL，置于10 mL量瓶中，用空白血浆（阴性对照液）稀释至刻度，即得（含地西泮约21.22 μg/mL）。 　　2.1.1.2 地西泮对照品溶液的制备 将地西泮对照品适量在105℃下，干燥至恒重，精密称取10.61 mg，置于100 mL容量瓶中，加入甲醇适量，振荡2～3 min，加甲醇试剂至刻度，制得地西泮贮备溶液，备用。精密量取地西泮标准贮备液适量，制备地西泮对照品溶液（浓度：21.22 μg/mL）。 　　2.1.1.3 阴性对照液的制备 精密吸取空白血浆适量，加入3倍量甲醇沉淀蛋白，振荡3 min，12 000 r/min离心10 min，取上清液备用。 　　2.1.2 零阶紫外扫描光谱 　　分别将血浆样品溶液（a液，含地西泮约21.22 μg/mL），地西泮对照品溶液（b液，浓度：21.22 μg/mL），阴性对照液（c液，空白血浆）进行紫外光谱扫描，波长范围为190～400 nm。光谱扫描条件：光度模式为Abs，扫描模式为单一，扫描速度为快速，光谱带宽为2 nm，采样间隔为0.1 nm。见图1。 　　从图1可以观察到，空白血浆与地西泮之间的紫外吸收有重叠，干扰较大，利用紫外分光光度法无法直接测定血浆中地西泮的含量。 　　2.1.3 一阶导数光谱及测定波长的选择 　　取“2.1.2”项下a、b、c溶液，进行紫外光谱扫描，波长范围为190～400 nm。对扫描后的紫外光谱进行导数微积分转换，分别得到3种溶液的一阶导数光谱。扫描条件同“2.1.2”项下，微分波长差为10；缩放系数为1。见图2。 　　由图2可见：血浆样品溶液（a液）在240.0 nm波长处的谷-零振幅图谱与地西泮对照品溶液（b液）相一致，而空白血浆（c液）在此波长处的谷-零振幅值为0，因此，测定地西泮血药浓度的检测波长可以定为240.0 nm。 　　2.2 线性关系考察 　　精密吸取地西泮标准贮备液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，分别置于10 mL容量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，制成浓度（C）为5.35～31.85 μg/mL的系列工作液，以甲醇为空