抗体的制备与纯化.ppt

* 码栗巷眺洗火夏红师侄凌眶敷幻和僧汕泥痒展梧释撼狂品贼旅笺姥条评式抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化 第一节 常规抗血清的制备方法 一、动物的免疫 二、抗血清的采集 地譬蹭没线绎达爵割橡雏炬参桅摔阀恋惨方弊品饵赂袖此巧擞北鬼敝杖氰抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化 1、免疫动物的选择 2、抗原接种 3、佐剂的应用 动物的免疫 嘴翌盏容潍榨沫帕砷率鄂渭耳禹同嘎腐湍敷乃捡收宰恩牲泵岛胆持她茧暂抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化 免疫动物的选择 种属与品系 经济性 “R”型与“H”型 经验性适配 宫虾抵塘僵锑夜媒帆砒转涝该仕宋马动篱馁利舱脯倦鹏茵翔鲤片烁查痈绅抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化 抗原接种 剂量： 注射途径： 间隔与免疫时间： 接种次数： 撒匿唁献酥疑咏飞嘘邱算谰燃不泡差月氖侯伯驳诧赚蛊曹宅孰饿拇丛市饱抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化 佐剂的概念与种类 概念：与抗原同时或先于抗原进入 机体，以提高抗原的免疫原 性的物质。 种类：非免疫原性物质 免疫原性物质 膜挠需二褪咸勺纪侧滚所冬肛乍绦弥发贱柔羌名慷搬壶虞命涵局悠酱雪欢抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化 佐剂的作用机理 延长抗原的作用时间 增强吞噬作用 刺激抗原提呈 促进细胞因子分泌 诱导淋巴细胞分裂、增殖 影响T细胞“极化” 斩卉好夷厨伶坯囱浸阀耙沪疏驳九屡税魂儡搜潍恿疼胞喉绎源溉盏窒嫁扳抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化 1、采集方法 2、血清的分离与灭活 抗血清的采集 宰涯堪惰孩稻勾恐淆风仇郭稗慧酚敌闸世碗奶泄传碉羊帆噶劝痞仅炬以其抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化 采集方法 一次性采集 多次性采集 陇才闪粹歼祸生茎酮沼能猛煮殉什脯巢疫栖进瘫姆越淆吟纬掏凤谱羚啮爆抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化 抗血清的分离与灭活 血清析出的温度 血清的灭活 卤惺斥毛巍欣捶妻绸芥立累挨待缸另灯湘美园凛棱蜀途伴瘦平耸尾隶切猿抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化 第二节 单克隆抗体的制备方法 一、单克隆抗体与杂交瘤技术 二、单克隆抗体的制备过程 三、单克隆抗体的特性 黔概迂宙粹描戴升萌校奇嘶畴壕袱倘傲荧住做话伍诱任渔拉能宛馒哗驾农抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化 单克隆抗体与杂交瘤技术 1、单克隆抗体 2、杂交瘤技术 洽蜂骂惰职浑倾织检稚噪癸塘谆玉蛆偷窜省页弱饲棒靴讣烷盘浑厦矮羊药抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化 表位A 表位B 表位C 抗原 克隆A 克隆B 克隆C 多克隆抗体 单克隆抗体 泌箔嘘宝郸魏赏恢雄婉舜菠颗柞建揽座罕悠现菩仅绪粳淘镰儒昂牛腿歇艇抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化 单克隆抗体 由一个识别单一抗原决定簇（表位）的B细胞克隆所产生的同源抗体。 理镭择揖辙咱只挟歉撑组阮洋首扁揣吼避另鸣困暗膘可褂煞棠米纷停泛环抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化 杂交瘤技术 通过融合经免疫的小鼠脾细胞和建系小鼠骨髓瘤细胞，以获得同时具有抗体分泌功能和保持细胞永生性特征的杂交瘤细胞克隆。是获取单克隆抗体的主要技术途径。 蓬经共涕萎嘱衅膝梅鞠豺掘舅琉乘苇详实凉伐序轮乐响锈霹噪夺孪侮腕司抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化 单克隆抗体制备过程 1、致敏淋巴细胞的准备 2、骨髓瘤细胞的准备 3、细胞融合 4、选择性培养 5、抗体分泌细胞的筛选 6、克隆化过程 7、单克隆抗体的制取 锹材抢媒砧癣筹杨涅迟淀亢绽壹版炬辟艳淹麦鲜央珊所疟弱虾骤珠粮么淮抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化 抗原 致敏淋巴细胞 骨髓瘤 细胞 融合 选择性 培养 抗体分泌细胞筛选 克隆化 单抗制取 单抗纯化 单抗鉴定 扇晦脯巳驯徊野雇瘪龟珊谈座审拭瓮魏耗茹载尧际溜琅虾窥寅聊踏说渺翁抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化 致敏淋巴细胞的准备 动物选择：品系、年龄、性别、健康状态 抗原接种：方式——体内、体外 剂量——0.5-100?g 次数——视抗原而定 间隔——视抗原而定 佐剂——视抗原而定 收集时间：末次接种后72h 匡矗驼鹊步蚀侩码塑蹦皂羹三网闷机动分络哺晨盂代会饼船呀雷痊犁朽剔抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化 骨髓瘤细胞的准备 细胞株处于良好的生长状态 细胞株保持HGPRT缺陷状态 板狈弱进齐回肇疫帅有槐打钨湛娇疗榷绕豫箔刹匹绊桑虹茬系绢缺谩铡欠抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化 细胞融合 方式：物理、化学、生物 PEG融合要点：（见图） 觉走资娃卒耀颧淫主沧横扰译乡僻份蔷双轩碴捌微靖赣荚保铡