谈温经汤对子宫内膜异位症大鼠在位和异位内膜VEGF 及SPARC 表达的影响.docVIP

谈温经汤对子宫内膜异位症大鼠在位和异位内膜VEGF 及SPARC 表达的影响 　　子宫内膜异位症( endometriosis，EMs) 是妇科常见的疑难疾病和慢性疾病，影响了10% ～ 15% 生育期妇女的健康和生活质量，且发病率有明显升高的趋势。EMs 的特征是在宫腔以外部位( 主要是在盆腔腹膜和卵巢上) 存在子宫内膜样组织。该病临床表现复杂多变，极具侵袭性和复杂性，主要临床特征是慢性盆腔疼痛、性交痛和不孕。EMs 虽为良性疾病，但具有良性肿瘤的生物学特性和向恶性肿瘤转化的恶性变倾向。 　　目前，EMs 的发病机制仍不清楚，按照经血逆流的理论，在异位病灶的形成过程中，异位子宫内膜必须要经过“黏附-侵袭-血管形成”3 个过程，其中血管形成是其种植后生长的必要条件。血管内皮生长因子( VEGF) 是一种关键的血管形成刺激因子，异位内膜的种植依赖新生血管的形成和生长，与富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白( SPARC) 基因和肿瘤的浸润和转移密切相关，并通过与VEGF 的相互作用参与血管形成。EMs 的西医治疗战略是卵巢抑制，目前除根治性手术外，尚无一种理想的根治方法，无论是药物治疗抑或保守性手术均有相当高的复发率和副作用。中药作用于EMs 的临床疗效得到广泛认同，其最大优势是对卵巢功能无抑制作用。温经汤是调经祖方，自古至今临床应用于子宫内膜异位症、痛经等疾病。本研究通过观察温经汤对EMs 模型大鼠在位和异位内膜中VEGF 和SPARC 表达的影响，初步探讨温经汤治疗EMs 的作用机制。 　　1 材料与方法 　　1. 1 实验材料 　　1. 1. 1 动物 　　健康成熟未交配过的清洁级雌性SD大鼠，共33 只，8周龄，体质量( 180 plusmn; 20) g，由上海西普尔- 必凯实验动物有限公司提供，合格证号:SYXK( 沪) 2013-0027。按清洁级动物要求饲养，自由取水，室温( 25 plusmn; 1) ℃，相对湿度50% plusmn; 10%，光照明暗各12 h，标准喂食颗粒饲料( 上海西普尔-必凯实验动物有限公司) ，适应性饲养1 周。 　　1. 1. 2 药物 　　温经汤( 吴茱萸3 g、当归15 g、白芍12 g、党参12 g、川芎9 g、桂枝9 g、阿胶12 g、丹皮9 g、半夏6 g、麦门冬12 g、生姜3 片、甘草3 g) ，由上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院中药制剂室制备，含中药1. 05 g /ml; 米非司酮片( 25 mg /片) ，由北京紫竹药业有限公司提供。 　　1. 1. 3 试剂和仪器 　　氯化钠注射液，由安徽双鹤药业有限责任公司生产; 戊巴比妥钠溶液( 蒸馏水配成30 g /L) ，由Sigma 公司提供。兔抗VEGF 抗体、兔抗GAPDH 抗体，购自Proteintech 公司; 兔抗SPARC 抗体，购自Santa Cruz 公司; DAB 显色剂，由Vector Laboratories 公司提供; 苏木素溶液，购自上海虹桥乐翔医用试剂技术有限公司; ECL 化学发光检测试剂盒，由北京康为世纪生物科技有限公司提供。DM750 光学显微镜，Leica 公司; Tanon 4100 数码凝胶图像处理系统，上海天能仪器有限公司。 　　1. 2 动物模型的建立 　　参考文献方法，采用手术自体移植法建立EMs 大鼠模型。30 只大鼠腹腔注射3%戊巴比妥钠溶液( 30 mg /kg) 麻醉后，无菌条件下剖腹，切口长约2 cm，取出左侧子宫，结扎子宫两端血管，剪下一段子宫，放入生理盐水中将子宫段纵向切开，分离子宫内膜和肌层，将2 块大小约5 mm times; 5 mm 的子宫内膜块缝合于右侧腹腔内壁血管丰富处，缝合肌肉层和皮肤。手术后3 周，再次开腹查看造模情况，见到异位内膜体积增大，呈透明囊泡状，且囊泡内可见淡黄色澄清积液，异位内膜周围可见血管形成为造膜成功。模型成功率约为93. 33%，选取造模成功大鼠28 只用于随机分组。 　　1. 3 分组、给药及取材 　　按照随机数字表，将造模成功的28 只大鼠随机分组。模型组( n = 6) : 给予生理盐水5 mg /kg 灌胃; 米非司酮组( n = 4) : 给予1. 24g /L 米非司酮5 mg /kg 灌胃; 温经汤低剂量组( n = 6) : 给予温经汤1. 8 ml /100 g 灌胃; 温经汤中剂量组( n = 6) : 给予温经汤3. 6 ml /100 g 灌胃;温经汤高剂量组( n = 6) : 给予温经汤7. 2 ml /100 g灌胃。另取3 只未手术大鼠作为空白对照组，给予生理盐水5 mg /kg 灌胃。连续灌胃给药21 d 后，麻醉状态下打开腹腔，腹主动脉取血