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归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 1．已知某种限制性内切酶在一线性DNA分子上有3个酶切位点，如图中箭头所指。如果在该线性DNA分子在3个酶切位点上都被该酶切断，则会产生a、b、c、d四种不同长度的DNA片段。现有多个上述线性DNA分子，若在每个DNA分子上至少有1个酶切位点被该酶切断，则从理论上讲，经该酶酶切后，这些线性DNA分子最多能产生长度不同的DNA片段种类数是（ ） A．3 B．4 C．9 D．12 C 2．限制酶是一种核酸切割酶，可辨识并切割DNA分子上特定的核苷酸碱基序列。下图为四种限制酶的辨识序列。箭头表示每一种限制酶的特定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来的DNA片段末端可以互补黏合？其正确的末端互补序列为何？ A. BamHI和EcoRI；末端互补序列—AATT— B. BamHI和HindⅢ；末端互补序列—GATC— C. EcoRI和HindⅢ；末端互补序列—AATT— D. BamHI和BglII；末端互补序列—GATC— B 3．已知某质粒上有2种限制性核酸内切酶的酶切位点，且两种酶的识别序列不同，如右图所示。若在多个该质粒中，加入限制酶Ⅰ、限制酶Ⅱ进行切割后，再加入DNA连接酶进行连接，结果得到的环状质粒中，碱基数目最少为 A．50 B．100 C．200 D．250 B 4．对符合设计要求的重组质粒进行酶切。假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图中标示的酶切位点和所列的识别序列，采用（EcoRⅠ和PstⅠ）酶切，与采用（EcoRⅠ和SmaⅠ）酶切，分别能得到几种DNA片断（ ） A．1种 1种 B ． 1种 2种 C ． 2种 1种 D ． 2种 2种 C 5.根据基因工程中的操作步骤，回答以下问题： 目的基因能与运载体结合，说明 ，目的基因能在受体细胞中得到表达，说明 ，受体细胞具备的条件是 。如何检验质粒是否导入受体细胞？ 。如何检测目的基因是否得到表达？ 。 【答案】DNA组成成分相同，都遵循碱基互补配对原则;所有生物公用一套遗传密码;没有与运载体相同的质粒或没有与运载体质粒相同的标记基因;检测质粒的标记基因;检测是否出现目的基因所控制的性状 6.（12分）某质粒上有SalI、HindIII、BamHI三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图9所示，请回答下列问题： ????（1）将含有目的基因的DNA与质粒分别用Sa1 I酶切，酶切产物用__________催化连接后，两个DNA片段的连接结果有_______________种。 ?? （2）在构建重组质粒时，应选用__________两种酶对__________进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。 ?? （3）为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，应在培养基中加入______________，理由是______________。 ?? ? （1）DNA连接酶?? （2）Sal I、HindIII 质粒和含抗盐基因的DNA （3）氨苄青霉素 重组质粒中含抗氨苄青霉基因而抗四环素基因被破坏 专题1《基因工程》复习 基因工程 基本工具 操作程序 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 运载体 分类及区别 作用 常用载体：质粒：特点 载体条件 其他载体 目的基因的获取 从基因文库中获取 人工合成 利用PCR技术扩增 基因组文库 cDNA文库 原理 条件 过程 基因表达载体的构建 目的 组成及作用 目的基因导入受体细胞 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 主要：农杆菌转化法 显微注射技术 Ca2+处理 目的基因的检测与鉴定 分子水平的检测 个体生物水平的鉴定 应用 转基因植物 转基因动物 基因工程药物 基因治疗 抗虫转基因植物 抗病转基因植物 抗逆转基因植物 改良植物品质 提高动物生长速度 改善畜产品质量 生产药物 做器官移植供体 基因诊断 蛋白质工程 概念 原理 应用 来源 特点 识别核苷酸序列 结果 II II II I 标记基因、目的基因、T-DNA、Ti-质粒、启动子、终止子、限制酶、DNA连接酶、逆转录酶、基因文库、基因组文库、 cDNA文库、PCR技术、热稳定DNA聚合酶、引物、转化、农杆菌转化法、