第十章免疫技术选读.ppt

竞争法特点 分析灵敏度（最低检测限）（95%可信度）： S0-2SD在该曲线上所对应的浓度值。 功能灵敏度： （变异）≤20%的最低可检测浓度。 线性范围： 　　功能灵敏度-变异≤20%的最高检测浓度。 相关系数：≥0.99的曲线范围。 (一)全自动化学发光免疫分析系统 一般由主机和微机两部分组成： （1）主机部分：包括 原材料配备部分：反应杯、样品盘、试剂盘、纯净水、清洗液、废水在机器上的贮存和处理装置。 液路部分：过滤器、密封圈、真空泵、管道、样 品及试剂探针。 机械传动部分：传感器、运输轨道。 光路检测部分：光电倍增管和线路控制板。 2．仪器组成 全自动化学发光 免疫分析系统 66 IMMUNOLOGY (一)全自动化学发光免疫分析系统 2．仪器组成 （2）微机系统 程控操作 指示判定 数据处理 故障诊断 自动监视 （二)全自动微粒子化学发光免疫分析系统 采用微粒子化学发光技术对人体内的微量物质以及药物浓度进行定量测定具有高度的特异性、高度的敏感性和高度的稳定性等特点 全自动微粒子化学发光免疫分析系统 1.分析方法 采用磁性微粒作为固相载体，以碱性磷酸酶作为发光剂，扩大测定的范围。 以免疫测定方法为基础： -竞争法 -夹心法 -抗体检测等 2.分析过程 抗原抗体结合； 加入碱性磷酸酶标记的抗体； 形成固相包被复合物； 在电磁场中进行2~3次洗涤分离； 加入底物； 通过光量子阅读系统记录发光强度； 在标准曲线上计算出待测抗原的浓度。 3.仪器组成 微电脑控制 样品处理系统 实验运行系统 中心供给和控制系统 电化学发光免疫分析技术在新一代实验室免疫检测技术中很有特点，它在20世纪如年代一问世就引起广泛的关注 德国公司在链酶亲和素—生物素包被技术基础上，引用电化学发光免疫分析技术并开发出相应的全自动电化学发光免疫检测系统 1.测定原理及过程 待测标本与包被了抗体的顺磁性微粒和发光剂标记的抗体共同温育（形成磁性微珠包被抗体—抗原—发光剂标记抗体复合物） 吸人流动室，缓冲液冲洗 磁性微粒流经电极表面时，被电极下的磁铁吸引，而游离的发光剂标记抗体被冲洗走 同时在电极加电压，启动电化学发光反应，使发光试剂标记物三氯联吡啶钉[Ru(bpy)3]2+TPA在电极表面进行电子转移，产生电化学发光 光的强度与待测抗原的浓度成正比 2.仪器组成及特点 由样品盘、试剂盒、温育反应盘、电化学检测系统及计算机控制系统组成 应用三种抗原抗体反应方法： -抑制免疫法 检测小分子量蛋白抗原 -夹心免疫法 检测大分子量物质 -桥联免疫法 检测抗体如IgG、IgM 另：钉标记用于DNA／RNA探针分析 主要应用于以下几方面检测： 1．甲状腺系统 2．性腺系统 3．血液系统 4．肿瘤标记物 5．心血管系统 6．血药浓度 7．感染性疾病 8．其他检测 （Ig、血清皮质醇、尿皮质醇、尿游离脱氧吡啶等） 第三节 放射免疫分析仪 放射性核素分析的高灵敏度与抗原抗体反应的高特异性结合 放射免疫技术主要包括： -放射免疫分析(,RIA) -免疫放射分析或免疫放射度量分析(IRMA) 一、 放射性核素的种类特点和检测仪的基本结构 （一）放射性核素的种类和特点 放射性核素依衰变方式分α、β、γ三种，用于放射性标记的有β和γ两类;分别用液体闪烁及γ计数器测定。目前常用的是γ型放射性核素，如125I、131I、57Cr和60Co，以125I最常用；β型放射性核素有3H、14C和32P，以3H最常用 一、 放射性核素的种类特点和检测仪的基本结构 （二）检测的基本结构及其探测原理 将射线（放射能）与闪烁体的作用转换成光脉冲（光能），然后用光电倍增管将光脉冲转换成电脉冲（电能）。 电脉冲在单位时间内出现的次数（即仪器记录的cmp值）反映了发出射线的频率 电脉冲的电压幅度则反映了射线能量的高低。 二、晶体闪烁计数器组成和工作原理 （一）仪器组成及工作原理 1．闪烁体 2．光电倍增管 （1）光阴极 （2）打拿极 （3）阳极 3．多道脉冲分析器 多道分析器（MCA）是进行能谱分析的重要仪器。现代的MCA与通用微型计算机有许多共同特性，是现代核探测分析及放射影像装置的重要组成部分。 （二）γ-辐射计数器 整机可分为： 采样部分---探头、换样装置、高低压电源、放大器及单道组成