SOP02-906-00高效液相色谱法标准操作规程.docxVIP

标准操作规程题 目：高效液相色谱法标准操作规程编 号：SOP02-906-00制 订 人：制定日期：版 本：1页数：1/5审 核 人：审核日期：颁发部门：质量管理部批 准 人：批准日期：生效日期：目 的：高效液相色谱法的检验操作，确保检验结果的正确性范 围：高效液相色谱法的检验分发部门：质量管理部、QC室。标 题正 文122.1 概述 高效液相色谱法是高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由于流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。 对仪器的一般要求和色谱条件 所用的仪器为高效液相色谱仪。仪器应有定期检定并符合有关规定。 色谱柱 反相色谱系统使用非极性填充剂，常用的色谱柱填充剂有化学键合硅胶，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，心基硅烷键合硅胶和其他类型硅烷键合硅胶（氰基键合硅烷或氨基键合硅烷）也有使用。正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。离子交换色谱系统使用离子交换填充剂；分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多空微球等填充剂。对映异构造的分离通常使用手性填充剂。 填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响供试品的保留行为和分离效果。分析分子量小于2000的化合物应选择孔径在15nm（1nm=10A）以下的填料。分析分子量大于2000的化合物应选择孔径在30nm以上的填料。 除另有规定外，普通分析柱的填充剂粒径一般在3~10μm之间，粒径更小（约2μm）的填充剂常用于填装微径柱（内径约为2mm）。使用微径柱时，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配：如有必要，色谱条件也需作适当的调整。当对其测定结果产生争议时，应以品种项下规定的色谱条件的测定结果为准。标准操作规程题 目：高效液相色谱法标准操作规程编号：SOP02-906-00颁发部门：质量管理部生效日期：版本：1页数：2/5标 题正 文2.22.2.12.2.22.2.32.32.3.12.3.1.12.3.1.22.3.1.32.3.22.3.2.12.3.3.12.3.3.2 操作前的准备 流动相的制备：用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外-可见分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水应为新鲜制备的高纯水，可用超级纯水器制得或用重蒸馏水。凡规定pH值的流动相，应使用精密pH计进行调节。配制好的流动相通过适宜的0.45μm滤膜滤过，用前脱气。应配制足量的流动相备用。 供试溶液的配制：供试品用规定溶剂配制成供试溶液。定量测定时，对照品溶液和供试溶液均应分别配制2份。供试溶液在注入色谱仪前，一般应经适宜的0.45μm滤膜滤过。必要时，在配制供试溶液前，样品需经预净化，以免对色谱系统产生污染或影响色谱分离。 检查上次使用记录和仪器状态：检查色谱柱是否适用于本次试验，色谱柱进出口位置是否与流动相的流向一致，原保存溶剂与现用流动相能否互溶，流动相的pH值与该色谱柱是否相适应，仪器是否完好，仪器的各开关位置是否处于关断的位置。 操作 泵的操作用流动相冲洗滤器，再把滤器浸入流动相中，启动泵。打开泵的排放阀，用专用注射器从阀口抽出流动相约20ml，设置高流速（如PURGE9ml/min）或用冲洗键 进行充泵排气、观察出口处流动相呈连续液流后， 将流速逐步回零或停止（STOP）冲洗，关闭排放阀。将流速调节至分析用流速，对色谱柱进行平衡，同时观察压力指示应稳定，用干燥滤纸片的边缘检查柱管各连接上应无渗漏。初始平衡时间一般约需30分钟如为梯度洗脱，应在程序器上设置梯度状态，用初始比例的流动相对色谱柱进行平衡。 紫外-可见光检测器和色谱数据处理机的操作 开启检测器电源开关，选择光源（氘灯或钨灯），选定检测波长，待稳定后，测试参比和样品光路的信号应符合要求，设置吸光度方式和检测响应时间（一般不大于1秒），设置满刻度吸收值（适用于记录仪）。 把进样器手柄放在载样位置（LOAD）。 用供试溶液清洗配套的注射器，再抽取适量，如用定量环（LOOP）载样，则注射器抽取量应不少于定量环容积的5倍，用微量注射器定容进样时，进样量不得多于环容积的50%。在排除气泡后方能向进样器中注入供试品溶液标准操作规程题 目：高效液相色谱法标准操作规程编号：SOP02-906-00颁发部门：质量管理部生效日期：版本：1页数：3/5标 题正 文2.3.3.12.3.3.22.3.3.32.3.3.42.3.52.3.5.12.3.5.22.3.5.32.3.5.42.3.62.3.6.1 把进样器手柄放在载样位置（LOAD）。用供试溶液清洗配套的注射器，再抽取适量，如用定量环（LOOP）载样，则注射器抽取量应不少于