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亲和膜色谱的研究进展 摘要：亲和膜色谱又称亲和膜分离，，，，，biomacromolecules in the end of 1980s. Affinity membrane are achieved by attaching affinity ligands to the inner suface of the through pores in microfiltration membranes. So the main feature of AMC is the elimination of pore diffusion that exists as the main mass-transfer resistance in conventional column chromatography with porous particles. In an AMC, target products included in a crude mixture can bind to the affinity ligands by passing througe the membrane. Thus，AMC can be operated at a high flow rate with a low pressure drop, resulting in a large throughput for protein purification. This article reviews the fundamental aspects of affinity membrane chromatography, separating process and its application. Activating and modifying methods of matrix materials are introduced. The principles of selecting ligands and spacer arms are elucidated. The advances in the theoretical aspect study and trends of AMC are also described. Keywords: Affinity membrane chromatography, membrane matrix, ligand, spacer arm, application 1 前言 近年来，生命科学和生物工程得到了迅速发展，蛋白、酶、多肽、疫苗等生物制品成本的30%～60%来自于分离过程。分离过程的成效已成为生物技术发展的一个重要方面。这些生物大分子一般都具有生物活性，一旦脱离了它们原来的生理环境，或与某些金属或载体相接处，很容易改变其分子构象，并失去其固有的活性。它们的热稳定性也比较差，有的需在恒温(如体温)才不变性，有的需在低温(如4℃)才能保持其活性。在用生物技术制取的初产品中，其浓度都较低，因此对它们的浓缩、分离、提取是一个难题。采用传统的方法和手段，如沉淀、结晶、离心、冻干、萃取等都还达不到所要求的纯度，还必须用色谱、膜分离等手段进一步分离纯化。 80年代末出现了将亲和色谱与膜分离技术结合起来的一项新型的分离技术一亲和膜分离技术[1]。它利用膜作基质。对其进行改性，，，，γ-球蛋白与固载在尼龙膜上的蛋白质A结合速度要比与固载在琼脂糖上的蛋白质A结合快200-300倍[2]。亲和膜色谱与传统的膜分离、亲和色谱相比，，， ，，，，，，，，，，，，， 操作时除要选择适宜的加料速度和操作温度外，，，，，ω-氨烷基化合物与基质偶连，然后在间隔臂上接上配基。一般认为，为了获得最佳偶合作用，配基与膜之间必须插人至少一个亚甲基的桥。但如果生物大分子的表观相对分子质量低或与固定配基的亲和性高，则间隔臂长度不如在大蛋白或低亲和系统中要求严格。最近又有提出采用亲水性更强的间隔臂代替疏水间隔臂，能极大地降低非生物特异性吸附作用[13]。 3.4 亲和膜的制备、活化及偶合 亲和膜的制备主要分为3步：成膜，功能化，活化，按它们进行的先后顺序不同可分为以下几种途径[11] （1）膜材料→功能化的膜材料→功能化的膜→活化的膜 （2）膜材料→膜→功能化的膜→活化的膜 （3）膜材料→功能化的膜材料→活化的膜材料→活化的膜 功能化即通过引人适当的基团, 使膜材料或膜改性。而活化则是使引人的基团活性增强，能与配基作用。 具体采用哪一种途径更好，因材料而异，一般认为，活化在成膜后进行更好一些。成膜方法和一般的制膜方法一样，主要是采用溶胶一凝胶转化法，也可采用静电纺丝法制得膜。 功能化的方法可以通过一般的化学反应，也可以通过辐射接