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桂花叶枯病病原菌生物学特性研究 　　摘要 由木樨生叶点霉引起的桂花叶枯病是桂花上普遍发生，且为害较为严重的病害之一。对病原菌进行了生物学物性研究，研究结果表明，病原菌菌丝在PDA、MA和OA等3种培养基上均能生长，在PDA和MA上生长相差不大，在OA上生长相对缓慢；菌丝生长适宜pH值为4.0～7.0，最适pH值为6.0；生长适温为24～30 ℃，最适温度为26 ℃，黑暗有利于病原菌的生长。 　　关键词 桂花叶枯病；木樨生叶点霉；生物学特性 　　中图分类号 S436.8 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）11-0153-02 　　桂花，木犀科、木犀属，是常绿灌木至小乔木，为我国传统十大名花之一。因其具有较高的观赏、药用和食用价值，因此桂花是一个生态效益、社会效益和经济效益都较高的园林树种[1]。目前，在合肥地区，桂花是广泛种植的绿化树种。对合肥市肥东县各地苗圃、公园、小区及行道路桂花病害调查表明，本县桂花主要病害为枯叶病、褐斑病及冠瘿病，其中最严重的是枯叶病。据笔者调查，该病主要发生在新栽植1～3年桂花叶片上，主要表现症状为病斑往往发生在叶尖或叶缘，初为褪绿淡褐色小点，渐向内扩张后为圆形或是向里扩大呈不规则块状大斑，灰褐色至红褐色，病斑上散生许多黑色小点粒状物，并常常导致叶片脱落。查阅国内对桂花叶枯病的研究报道，其病原主要为大茎点霉属（Macrophoma）和链格孢属（Alternaria）等属真菌[2-6]，而在肥东地区桂花枯叶病的病原经鉴定为木樨生叶点霉（Phyllosticta osmamthicola Trian.）[7]。 　　本文对桂花叶枯病进行病原菌分离纯化，并对病原菌进行了生物学特性研究，以期为桂花叶枯病的综合防治提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 供试菌株 　　2015年1月对采至于合肥市肥东县张集苗圃的桂花叶枯病病叶进行显微鉴定，确定其病原为木樨生叶点霉，属半知菌亚门腔孢纲球壳孢目球壳孢科叶点霉属[7]。采用组织分离法对病原菌进行了分离培养，获得纯菌株[8]。生物学特性研究所采用方法主要参考方仲达（1998）等[3，5，8-10]。 　　1.2 营养对菌落生长的影响 　　将供试菌株菌种在25 ℃的恒温培养箱中培养5 d，于菌落国缘打取直径4 mm菌丝块接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）、燕麦芽汁琼脂培养基（MA）、麦片琼脂培养基（OA）平板上，置光照培养箱中，25 ℃恒温培养，每个处理设3次重复。采用十字交叉法每天测量不同培养基上的菌落直径。 　　1.3 pH值对菌落生长的影响 　　用0.1 mol/L HCl和0.1 mol/L NaOH溶液将经高温灭菌后的PDA培养基的pH值分别调至2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0，将直径4 mm菌丝块接种于不同pH值的培养基上，后置于25 ℃恒温培养，共8个处理，每个处理3次重复，每天测量各菌落直径。 　　1.4 温度对菌落生长的影响 　　将直径4 mm菌丝块接种到PDA平板上，分别置于5、10、15、20、24、25、26、28、30、35 ℃下恒温培养，共10个处理，每个处理3次重复，每天测量菌落直径。 　　1.5 光照对菌落生长的影响 　　将直径4 mm菌丝块接种到PDA培养基上，分别在室内漫射光/黑暗自然交替、全光照、全黑暗下，25 ℃恒温培养。每个处理3次重复，每天测量各菌落直径。 　　2 结果与分析 　　桂花叶枯病病原菌在不同培养基、pH值、温度、光照处理条件下培养时，其菌落特征几乎一致，菌落生长速度较快，初期，菌落圆形，菌丝为白色，絮状或葺状；后期，菌丝呈灰黑色。 　　2.1 营养对菌落径向生长的影响 　　桂花枯叶病病原菌在3种培养基上均能生长。病原菌初期在PDA上生长速度稍慢于MA，但培养3 d后，两者生长速度相差不大；但在OA培养基上的菌落生长速度较慢。 　　2.2 pH值对菌落生长的影响 　　培养基的酸碱度大小对菌落生长影响较大，由图2可知，在pH值为3～8时，菌落均可生长，其生长适宜pH值为5～7，生长的最适pH值为6。在pH值为6时，培养5 d时，菌落直径可达89.3 mm，病原菌生长喜偏酸环境。在pH值为2和pH值为9时，桂花叶枯病病原菌菌落几乎不生长。 　　2.3 温度对菌落生长的影响 　　由图3可知，温度对桂花叶枯病病病原菌菌落生长的影响较大；低于5 ℃和超过35 ℃时，菌丝几乎停止生长，而在5 ℃与35 ℃时，菌丝生长缓慢；该菌生长的温度范围为5～35 ℃，适宜温度为24～30 ℃之间，最适温度为25 ℃。 　　2.4 光照条件对菌落生长的影响 　　表1为不同光照条件下菌落生长直径。由表1可知，全黑暗处理在25