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桉树人工林根际土壤DNA提取的优化 　　摘要：通过优化土壤微生物总DNA的提取方法，获得高纯度、高得率和完整性好的总DNA，为桉树种植地土壤微生物群落多样性的分析奠定基础。综合比较已报道的土壤微生物DNA提取方法的优缺点，设计了7种从巨桉（Eucalyptus grandis Hill ex Maiden）人工林根际土壤中直接提取微生物DNA的方法，并通过PCR扩增、DGGE电泳及荧光定量PCR分析比较了不同方法所提取DNA的质量以及对后期分子生物学研究的适用性。结果表明，使用PVPP和硫酸铝铵联用吸附腐殖酸杂质后，采用PEG 8 000沉淀能够有效地提取桉树根际土壤DNA。该方法提取的DNA纯度最高，OD260 nm/OD230 nm达到2.45，OD260 nm/OD280 nm达到1.78，DNA得率为5.56 μg/g土壤，适用于PCR扩增和荧光定量分析，并且通过DGGE电泳分离出最丰富的条带，是一种高效的提取土壤微生物DNA方法。 　　关键词：桉树（Eucalyptus）人工林；根际；土壤；DNA提取；PCR扩增 　　中图分类号：Q781；Q939.96 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）12-3207-05 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.12.053 　　Abstract： In order to obtain DNA with high purity， high yield and good integrity from the soil， for the analysis of the soil microbial diversity of Eucalyptus plantation， after comprehensive comparison of strengths and weaknesses of the commonly used methods for microbial DNA isolation，seven methods were designed to extract microbial DNA directly from the rhizosphere soil，and the different extraction methods were evaluated comprehensively for the DNA quality and applicability of the molecular biology by PCR， DGGE and RT-PCR. The results showed that during the improved high salt extraction procedures， PVPP and AlNH4（SO4）2 added in the DNA extraction buffer， and PEG 8 000 precipitation were required for the effective adsorption of humic acid impurities.The method gave the purest DNA with 2.45 at OD260 nm/OD230 nm and 1.78 at OD260 nm/OD280 nm， and the yield was appropriate with 5.56 μg/g DNA rhizosphere soil， which was suitable for PCR and RT-PCR， and the most abundant bands could be obtained by DGGE as well. 　　Key words： Eucalyptus plantation； rhizosphere； soil； DNA extraction； PCR amplification 　　土壤微生物是影响土壤生态过程的一个重要因素，在土壤形成与发育、土壤结构改良、肥力保持以及高等植物的生长等方面具有重要作用[1]。根际作为植物根和土壤的界面，定殖了大量的微生物和无脊椎动物，被认为是地球上最具动态的交界面[2]。在植物根系和土壤微生物相互作用的过程中，土壤微生物群落结构变化对根际微生态系统中养分活化、植物抗病性等方面都产生一系列影响[3]。近些年，关于林木根际土壤微生物的研究日趋增多，已在多个地区和多个树种上得到开展（茶树、落叶松、刺槐等）[4，5]。但目前关于桉树根际土壤微生物的研究仍以少量分离培养的方法为主[6，7]。桉树（Eucalyptus robusta Smi