正交设计法优化厚朴七物颗粒剂的提取工艺.docVIP

正交设计法优化厚朴七物颗粒剂的提取工艺 　　摘 要：目的：采用正交设计优化厚朴七物颗粒剂的水提取工艺。方法：正交法考察加水倍数、煎煮时间、煎煮次数三因素对水提取工艺的影响。HPLC法对有效成分厚朴酚与和厚朴酚进行含量测定。结果：10倍加水量，1h的煎煮时间，煎煮2次为最佳提取工艺。HPLC法含量测定：厚朴酚与和厚朴酚回归方程分别为Y=6856 X-372.5，r=0.9999，线性范围1.057-6.342 μg、Y=6427 X+583.6，r=0.9999，线性范围0.728-4.368 μg。检查项中阴性对照、稳定性、精密性等试验均符合试验标准。结论：优化的提取工艺高效稳定。 　　关键词：厚朴七物颗粒剂；正交设计；高效液相色谱法 　　厚朴七物汤出自东汉医学名家张仲景的《金匮要略》 [1]。应用于胃肠炎、肠梗阻、肠痉挛、食积发热、发热腹痛、老年习惯性便秘等病症，疗效显著。目前，在临床上仍沿用其传统的汤剂剂型，尚无关于厚朴七物汤中药制剂的相关文献报道，给患者的使用带来极大不便。本课题采用正交试验考察了加水倍数、煎煮时间和煎煮次数对厚朴七物颗粒剂提取工艺的影响，为“厚朴七物汤”的颗粒制剂在临床上更广泛的应用提供理论支持。 　　1.材料与方法 　　1.1 仪器 　　十万分之一电子天平（BP211D型） Sartorius ； Waters 600高效液相色谱系统（美国） ；Waters2996二极管阵列检测器 ；Waters717plus 自动进样器（含48位及96位进样盘）；超声波清洗仪（SB3200型）上海Branson ； C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）大连伊力特 。 　　1.2试剂与药材 　　厚朴酚对照品与和厚朴酚对照品（购于中国药品生物制品检定所）、甲醇（色谱纯）、超纯水、甲苯一甲醇（17：1）。本课题中使用的厚朴、枳实、桂枝、大黄、甘草等中药材均购于哈尔滨北京同仁堂分店。 　　2. 方法与结果 　　2.1含量测定方法建立 　　2.1.1溶液的配制 　　对照品溶液制备：精密称取厚朴酚与和厚朴酚的对照品4.228 mg、2.9142 mg，置于10 mL的容量瓶中，加甲醇适量溶解后稀释至刻度，充分摇匀即得1 mL含厚朴酚0.4228 mg与和厚朴酚0.2914 mg的对照品溶液。 　　供试品溶液的制备：精密称取恒重干燥提取物3.000 g，置于锥形瓶中加甲醇25 mL，称重，密塞后超声处理30 min，冷却后加甲醇至原始重量，摇匀后滤过即得。 　　阴性样品溶液的制备：处方中除去厚朴后的各种药材，采用与供试品同样的制备工艺，制备出不含有厚朴的阴性样品溶液。 　　2.1.2色谱条件[2] 　　C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相甲醇-水（78：22），流速1.0 mL/min，检测波长294nm，柱温25 ℃，进样量5 μL。 　　2.1.3标准曲线的绘制 　　精密量取含厚朴酚与和厚朴酚的对照品混合液2.5 μL、5.0 μL、7.5 μL、10 μL、12.5 μL、15 μL。依次注入高效液相色谱仪中，对每次样品进行检测，求出峰面积并对结果进项线性分析，考察其线性关系。求得回归方程：厚朴酚，Y=6856 C-372.5，r=0.9999，线性范围1.057-6.342 μg；和厚朴酚Y=6427 C+583.6，r=0.9999，线性范围0.728-4.368 μg。 　　2.1.4精密度试验 　　取上述含有厚朴酚与和厚朴酚的混合对照品溶液5 μL，重复进样6次，对峰面积A进行偏差分析。得厚朴酚的峰面积 RSD 为1.04 %，和厚朴酚的峰面积 RSD为1.07 %。 说明仪器精密度良好。 　　2.1.5稳定性试验 　　取配制好的供试品溶液，密封后在室温保存，考察时间分别为0，12，24，36，48，60h的含量，对实验结果进行偏差分析。结果显示，RSD值为0.5401 % ，表明此含量测定方法的稳定性良好，60h之内可以保证样品稳定。 　　2.1.6回收率试验 　　取供试品溶液6份（其厚朴酚浓度为0.844 mg/mL）。并配置厚朴酚对照品浓度同样为0.844 mg/mL的溶液，精密量取上述两种溶液各2.5 μL，加入50 mL量瓶中，甲醇稀释至刻度，分别进样并分析所测量结果。显示，本方法加样回收率为99.5 %，且RSD值为1.034 %，在偏差允许范围内，准确性较高。 　　2.2提取工艺的考察 　　2.2.1处方的确定 　　原处方根据汉代度量衡与现代单位之间的换算之后，厚朴七物汤处方为：厚朴24 g，甘草9 g，大黄9 g，大枣20 g，枳实5 g，桂枝6 g，生姜15 g。 　　2.2.2提取方法与因素水