第十五章核酸的研究方法-吉林大学.ppt

主要内容：主要介绍核酸的分离纯化、含量测量、超速离心、凝胶电泳、序列测定、PCR、DNA的化学合成 一、核酸的分离、提纯和定量测定 核酸的分离、提取通则 为了得到完整的大分子核酸，一般要注意3点 : 1．保持低温（0～4℃）。 2．防止过酸、过碱，避免剧烈搅拌。 3．防止核酸酶的作用。 抑制DNase： 可加柠檬酸钠、EDTA等金属螯合剂；或加去污剂 十二烷基硫酸钠（SDS）；或加蛋白变性剂。 抑制RNase： （1）实验器皿高温，或高压灭菌，不能高压灭菌的用具用0.1%二乙基焦碳酸盐（diethyl pyrocarbonate, DEPC）处理。 （2）加强的蛋白变性剂如硫氰酸胍、异硫氰酸胍等。 （3）加核糖核酸酶阻抑蛋白（RNasin）等RNase的抑制剂。 （一）大分子DNA的提取 1．材料的选择 　　　 2．细胞破碎 　　　　3．去蛋白质 （1）SDS （2）苯酚法 （3）氯仿法 （4）酚:氯仿:异戊醇＝25:24:1 4．沉淀DNA 5．去RNA 等杂质 6．进一步纯化 生物材料 DNP（RNP） DNP