10生化反应试卷.ppt

Company Logo LOGO （二）生化反应动力学 1. 酶催化反应动力学 酶催化反应动力学 微生物反应动力学 灭菌动力学 (1) 酶反应速率与底 cS小， rP ～ cS （线性） cS很大： cS — 底物浓度 物浓度关系 rP?rP,max rP,max rP cS 0 (2) 米氏方程 Michaelis-Menton equation E — 游离酶 S — 底物 ES — 复合物 P — 产物 达平衡时： cE,0— 酶初始浓度， 反应过程保持恒定 米氏常数 则： 当： 单底物酶催化反应米氏方程 （Michaelis-Menton equation） ? 说明： ① rP～ cS 双曲线型 ② ③ 线性 酶活性部位 底物 占 据 全 部 零级反应 rP～ cS rp= rp,max 一级反应 零级反应 混合级反应 若 Km = cS Km与cS同单位 (3) 米氏常数Km的确定 ——双倒数作图法 注： Km 是酶催化反应过程的重要动力学常数 ? Km = f(k1、k2、k+2) 酶催化反应的性质 反应条件 酶催化反应速率 之间的关系 Km是酶的特征常数： 不同的酶， Km 不同； 同一种酶 不同的底物 Km 不 同 表示酶与底物的亲和力 ? Km表达 (4) 抑制剂对酶催化反应过程的影响 抑制作用： 某些物质存在 酶活性降低或丧失 抑制剂 抑制作用类别 可逆抑制 抑制剂 酶蛋白 非共价键 结 合 不可逆抑制 抑制剂 酶的某些活性基团 共价键 结 合 底物抑制 cS ?，rP ? 底物抑制的机理： 不具有催化活性， 不能分解为产物 生成 P 的动力学方程为： 平衡时： 离解常数 且： 得： 底物抑制存在时的反应速率 ? 底物抑制存在的最佳底物浓度确定： 操作： 保持cS = cS,opt，rP = rPS,max —— “流加” ( fed batch ) 分批加入底物 2. 微生物反应 (1) 微生物群体生长规律 微生物典型生长曲线 培养时间 t Ⅰ Ⅰ— 延迟期 （适应环境阶段） Ⅱ Ⅱ— 指数生长期 对 数关 系 cX t cX — 细胞浓度，kg干重·m-3 细胞生长速率： 即： rX — 细胞生长速率，kg 干重?m-3·s-1 rX ? cX ? — 细胞比生长速率，s-1 （单位菌体浓度的生长速率） 对数生长期， ?不受基质浓度限制， ? 达 ?max ∴ 该阶段细胞繁殖很快 微生物典型生长曲线 培养时间 t Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅲ — 稳定期 Ⅳ Ⅳ— 衰亡期 (2) 微生物反应动力学 ① 莫诺方程 (Monod) 微生物反应可以基元反应表示： 式中： X0 — 有生命但不处于分裂状态的静止细胞 Xg— 可以分裂为两个新的静止细胞的孕细胞 S — 基质（原料） 细胞总浓度： Monod方程： 式中： cS —— 限制性基质浓度 KS —— Monod常数 说明： a. 当cs很小时 ∴ S为限制性基质 cS?， ? 明显? b. 当cS KS ? 与基质浓度无关 c. cs介于a、b之间， ? ～cS 服从Monod方程 ? ? ? max ② 基质消耗动力学 基质消耗于 细胞生长 维持细胞生命所需能量 产物生成 ∴ 式中： —— 对基质的细胞得率 Company Logo