植物组织培养--郑永娟第四章植物组织培养拓展技术课案.pptVIP

第4章 植物组织培养拓展技术 4.1 细胞培养 细胞培养是将从植物的培养物游离的细胞或细胞团，在人工培养基上进行的培养的方法。通过细胞继代培养，使细胞不断增殖，还能使高等植物的单个细胞经过离体培养后细胞分裂形成细胞团，再经过细胞分化最后产生完整的植株。 4.1.1 单细胞的分离 4.1.1.1 机械分离 先将植物叶片取下经过无菌处理后，在研钵中轻轻研碎，经过一定孔径的纱布或不绣钢滤网过滤，取出过滤后的研磨介质经过低速离心等其他处理使细胞得到纯化。 4.1.1.2 酶解分离 用纤维素酶和果胶酶等酶液处理适合植物外植体即可得到所需要的单细胞。 4.1.1.3 由组织培养物分离 离体培养的愈伤组织分离单细胞。 机械分离法和酶解分离法的比较 4.1.2 单细胞的培养 4.1.2.1 看护培养法 含义：用一块活跃生长的愈伤组织块来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。 用途：诱导形成单细胞系。 要求：看护愈伤组织处于活跃生长状态；愈伤组织和所要培养的细胞可以是同一个物种也可以不同。 看护培养的方法 （1）在一个培养瓶中加入一定量厚的固体培养基，灭菌后备用。 （2）无菌条件下，将一小块活跃生长的愈伤组织接种到培养基上，再在愈伤组织块上放一片已灭菌的滤纸，然后放置一个晚上。 （3）将分离的单个细胞接种到培养基的滤纸