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核酸扩增技术
季敬璋
温州医科大学
1
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5.1 聚合酶链反应技术
? 聚合酶链反应 （polymerase chain reaction ，PCR ） 技术：是
利用针对目的DNA序列设计的一对特异引物，以目的DNA
序列为模板，在耐热的DNA聚合酶作用下，经过多次“变性-
复性-延伸反应”的循环过程，体外扩增目的DNA序列的技术。
? 可以将目的DNA片段百万倍的放大，极大地提高核酸分子
检测的灵敏度，理论上其检测的灵敏度可以达到一个细胞、
甚至一个分子的水平。
3
? PCR技术是80年代中期发展起来的技术，
是生物技术领域中最重要的四项生物技术
（即细胞融合技术、分子克隆技术、蛋白
工程技术和基因扩增技术）之一。
? PCR技术具有特异、敏感、产率高、 快速、
简便、重复性好、易自动化等突出优点。
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5.1.1 PCR技术发展简史
? Watson 、Crick：DNA双螺旋结构。
? Meselson、Stah ：半保留复制模型。
? Khorana：最早提出体外扩增核酸的设想。
? Kary. B. Mu is：发明聚合酶链反应。
? Saiki：发现耐热DNA聚合酶。
5
5.1.2 PCR技术基本原理
? PCR技术实际上是模拟体内DNA半保留复
制过程，在模板DNA、引物和四种dNTP存
在的条件下，依赖于DNA聚合酶的酶促反
应，由变性－退火－延伸三个基本反应步
骤构成。
6
模板DNA
94℃变性
55℃退火
72℃引物延伸
第二次循环
模板变性退火
延伸
经25-30次循环，目的DNA增加106-7
PCR原理示意图
PCR的基本原理
1 2 3
高温变性 低温退火 适温延伸 重复1~3步
25~30轮
形
94
温
度 成 D
N
目 DNA片段
72 2 A
条 变
扩增100万倍以上
（℃） 子链延伸
单 性
链
DNA加倍
55
DNA单链
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