核酸扩增PCR解剖.pdf 159页

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  • 2017-03-08 发布
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    核酸扩增技术 季敬璋 温州医科大学 1 2 5.1 聚合酶链反应技术 ? 聚合酶链反应 (polymerase chain reaction ,PCR ) 技术:是 利用针对目的DNA序列设计的一对特异引物,以目的DNA 序列为模板,在耐热的DNA聚合酶作用下,经过多次“变性- 复性-延伸反应”的循环过程,体外扩增目的DNA序列的技术。 ? 可以将目的DNA片段百万倍的放大,极大地提高核酸分子 检测的灵敏度,理论上其检测的灵敏度可以达到一个细胞、 甚至一个分子的水平。 3 ? PCR技术是80年代中期发展起来的技术, 是生物技术领域中最重要的四项生物技术 (即细胞融合技术、分子克隆技术、蛋白 工程技术和基因扩增技术)之一。 ? PCR技术具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出优点。 4 5.1.1 PCR技术发展简史 ? Watson 、Crick:DNA双螺旋结构。 ? Meselson、Stah :半保留复制模型。 ? Khorana:最早提出体外扩增核酸的设想。 ? Kary. B. Mu is:发明聚合酶链反应。 ? Saiki:发现耐热DNA聚合酶。 5 5.1.2 PCR技术基本原理 ? PCR技术实际上是模拟体内DNA半保留复 制过程,在模板DNA、引物和四种dNTP存 在的条件下,依赖于DNA聚合酶的酶促反 应,由变性-退火-延伸三个基本反应步 骤构成。 6 模板DNA 94℃变性 55℃退火 72℃引物延伸 第二次循环 模板变性退火 延伸 经25-30次循环,目的DNA增加106-7 PCR原理示意图 PCR的基本原理 1 2 3 高温变性 低温退火 适温延伸 重复1~3步 25~30轮 形 94 温 度 成 D N 目 DNA片段 72 2 A 条 变 扩增100万倍以上 (℃) 子链延伸 单 性 链 DNA加倍 55 DNA单链

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    • 内容提供方:qq15608618368
    • 审核时间:2017-03-08
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