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农业与林业 375 一个可区分甘蔗品种抗感黑穗病性的SCAR标记① 阙友雄 陈天生 林剑伟 许莉萍 张木清 陈如凯 福建农林大学，农业部甘蔗生理生态与遗传改良重点实验室，福建省福州市，350002 摘要为建立甘蔗品种抗感黑穗痛性分子检测技术，采用集群分离分析法与RAPD相 结合，对杂交亲本ROC20、桂1l和部分杂交后代以及标准对照种进行PCR扩增，筛选到一条 可区分甘蔗品种抗感黑穗病性的多态性片段。采用pMDl8一T克隆载体，对该片段进行克 隆和测序。根据测序结果，设计一对长度分别为23bp和21bp的上、下游引物。对上述材料 进行SCAR标记验证，结果显示，扩增结果和RAPD标记结果一致，RAPD标记已经被成功地 转化为SCAR标记。该SCAR标记有望用于甘蔗抗、感黑穗病基因型的鉴定。 关键词 生物化学与分子生物学 黑穗病 RAPDSCAR scitaminea 由黑粉菌(Ustilago Syd．)引起的甘蔗黑穗病是甘蔗栽培上最主要的病害之一，在世界 各植蔗区普遍发生，造成感病品种蔗茎产量和蔗糖分的严重损失，就世界范围而言，甘蔗黑穗病的危害 和蔓延有日趋加重的趋势，有关黑穗病的研究越来越受到重视。由国际甘蔗技师协会(ISSCT)牵头成 立了有美国、印度、澳大利亚、巴西和中国台湾等参加的甘蔗黑穗病菌生理小种普查的国际性协作研究 小组。在我国，随着旱地植蔗面积的扩大，该病的危害加重。国家从“八五”攻关开始关注该病，“十五” 国家“863”计划、国家行业重大项目和国家自然科学基金均对抗黑穗病标记辅助选择研究予以资助，培 育并种植抗病品种已成为各国的共识。 迄今甘蔗抗黑穗病性鉴定，仍采用人工接种田间种植的表型进行鉴定，但通过此法对抗性的确定至 少需两年新植或一新一宿的种植鉴定，周期长、工作量大，难以对大规模的样品进行测试，同时只能在高 代进行且存在环境的互作效应，针对抗病性的早代选择盲目性大。分子标记辅助选择是基于基因组核 酸水平的差异，不存在环境的互作效应，可以弥补传统抗性鉴定的不足。因此，可显著提高鉴定的准确 Characterized 性和选择效率。SCAR(SequencedAmplifiedRegion，序列特征扩增区域)标记是根据 RAPD标记两端的序列，设计合成1对18～25个碱基的引物，通过特异PCR扩增来揭示多态性，此类 标记结合了RFLP和RAPD优点，更便于育种工作中使用。 集团分离分析法(BulkedSegregantAnalysis，BSA)，又称为分离体分组混合分析法，该方法通过对 某个抗、感亲本单交后代的分离群体进行抗病性鉴定，然后选择几个具有极端抗病或感病个体．分别构 建抗、感近等基因池，特别适合于检测与目标性状连锁的标记。对于那甘蔗等难以获得NIL(Near-iso— lines，NII。)群体和DH(Double genie haploid)群体的作物，BSA占据了极其重要的位置。 应用分子标记技术辅助选择抗感黑穗病性的先决条件是获得与其连锁的特异多态性片段。本实验 态性片段进行克隆、测序，根据测序的结果，设计一对特异引物，将其转化为SCAR标记，以进一步提高 广”(2006一G37)。 376 第五届博士生学术年会论文集 对大量样品进行快速筛选、鉴定的能力。本研究的意义是一旦筛选到与抗病或感病基因连锁的SCAR 标记，就有望用于甘蔗抗黑穗病育种，实现抗病性的早代鉴定和选择。 一、材料与方法 (一)材料 1．植物材料 甘蔗热带种(Saccharam 1和2)，均来自于福建农大林大学甘蔗综合研究所。 2．主要生化试剂 DNA聚 dNTP，lOmer随机引物等常规分子生物学试剂购自上海生工生物工程技术有先公司，Taq 合酶购自大连宝生物公司，引物由上海生工生物工程技术有限公司合成。 (二)方法 1．甘蔗抗黑穗病鉴定方法 scitaminea)生