一个新的控制梨孢菌侵染钉形成的基因的研究.pdfVIP

萌发率没有明显变化，附着饱形成率明显减少，并且附着孢着色浅，并且有部分 变形。有性杂交和Southern杂交结果表明，突变表型与插入标记共分离，而且 质粒是单位点插入。 通过质粒拯救，获得了插入位点两端的侧翼核甘酸序列。将拯救的毗邻插入 位点的基因组序列与70．15基因组全序列进行比对，发现质粒插入一侧在 缺失。通过比对序列，将拼接起来的序列FGENESH分析表明，该基因由三个外 显子、两个内含子组成，编码447个氨基酸。氨基酸BLAST结果显示，推定的 氨基酸序列含有一个同源异型域，可能是一个转录因子。 用侧端序列筛选梨孢菌基因组TAC文库，获得6个阳性克隆。用限制性内 切酶对阳性克隆间的重叠关系进行分析，结果表明，克隆20N16中的一个XhoI 酶切片段包含了完整的预测基因片段。进一步以此片段和选择标记新霉素抗性基 因构建互补载体，转化突变体。获得的25个互补转化体均恢复了野生表型。同 时，用潮霉素抗性基因代替目的基因转化野生菌，所获得的基因敲除体与突变体 X3073的表型一致。 为了进一步明确该基因的功能，作者正在进行转录激活、亚细胞定位与表达 动态的分析。 一个新的控制梨孢菌侵染钉形成的基因的研究 黄俊丽，李茂华，彭友良 (中国农业大学植物病理学系，农业部分予植物病理学重点开放实验室，北京100094) 稻瘟病是危害水稻最为严重的真菌病害，也是研究植物．病原互作的模式系 统。对稻瘟菌致病分子机制的研究不仅有助于理解稻瘟菌的致病机理，进而为设 计新型药物提供可用的靶标，亦可为其它真菌病害的研究与防治提供可借鉴的理 论依据。 本项研究首先通过筛选稻瘟菌P131小种的REMI转化体库获得对水稻普感 品种丽江新团黑谷致病性减弱的突变体S1104。该突变体与野生型菌株P131相 比，表现为稻叶上引起的病斑数明显减少；在洋葱表皮上侵染钉形成率只达到野 生型的45％。遗传杂交分析表明该突变体的突变表型和潮霉素抗性标记共分离， 说明突变表型是由外源质粒的插入引起的。Southern杂交表明，质粒在突变体基 因组中有两个插入位点。进一步对突变体与对应野生型S1528杂交的子囊孢子后 代进行分析，获得了一个具有突变表型、质粒单位点插入的子囊孢子后代S9。 9 对S9进行质粒拯救，获得了与插入位点相邻的基因组序列。将此序列ij已 公布的稻瘟菌基因组全序列进行比较分析，发现质粒插入在conti92．26上32891 个基因。 为了确定控制该突变表型的基因并验证其功能，作者进行了基因的互补实验 和敲除实验。分别用包含两个基因的片段和只包右侧基因的片段构建互补载体， 转化突变体。所得到的互补转化体都恢复为野生型。因而用潮霉素抗性基因代替 右侧的目标基因构建敲除载体转化野生菌株P131，所得到的基因敲除转化体的表 型与突变体S1104完全一致。这些结果证明插入位点右侧的基因控制该突变性状。 通过RT-PCR的方法获得了全长cDNA。序列比对发现，该基因包含6个外 显子，编码695个氨基酸残基的蛋白质——与GENSCAN预测的结果一致。经 cerevisiae的一个几丁质合成 氨基酸blast分析，推定的蛋白质与Saccharomyces 酶有28％的一致性。将该基因与绿色荧光蛋白(GFP)基因融合转化野生型131， 转化体接种洋葱表皮，结果表明该基因的表达产物存在于细胞质中。利用基因本 身的启动子来作为GFP基因的启动子来分析该基因的表达动态，表明该基因在 附着胞和侵染钉的形成过程中能够表达，说明它在稻瘟菌的侵入过程中发挥其作 用。 目前，正在检测、比较突变体、敲除体与野生型的几丁质含量。 利用网络资源预测稻瘟菌分泌蛋白的初步分析 苏源1，一， 李成云2，赵之伟1’，周晓罡3，李进斌4，杨静2，刘林2，业艳芬2 (1云南大学省部共建生物资源保护与利用国家重点实验室培育基地昆明650091： 2云南农业大学教育部生物多样性与病虫害控制重点实验室，昆明650201； 3云南省农业科学院生物技术品种资源研究所，昆明650223； 4云南省农业科学院植物保护研究所，昆明650205) 分泌蛋