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生命科学学院 本科生能力提高项目（科研训练）基金 子课题概要 申请类别： 指南项目□ 开放项目□ 课题名称： 扁桃体B淋巴细胞分离与纯化 教师姓名： 李煜 研究方向： 动物细胞工程 合作指导教师： 李瑶 拟接收本科生年级和人数： 07或08级生物技术专业4人左右 研究项目介绍 背景知识简介 （或训练内容） 由于单克隆抗体(monoclonal antibody )具有纯、效价高、特异性强少或无血清交叉反应等特点已被广泛应用于医学生物学各领域。,尤其是抗体库技术、鼠抗体人源化改造技术以及近年利用转基因技术研制完全人源化抗体的突破,为单抗进入临床治疗提供了良好的应用前景。 人源化单克隆抗体较鼠源化有许多优点，而最显著的优点是可较大范围的降低抗体注射到人体内后的免疫排斥反应，增加药物的效价。世界上人源化单克隆抗体的制备大多在传统单抗基础上以基因或抗体表面修饰手段来改造抗体，以减少其在人体内的异源性（如嵌合抗体，CDR移植抗体，SDR移植抗体，转基因小鼠等），而很少有直接以人的浆细胞和瘤细胞融合获得单抗的的试验。其主要原因是人体特异性淋巴细胞的获得，不能像动物那样简单。免疫过程和脾细胞的获得都受到很大限制。 本项目拟从人体扁桃体分离纯化B淋巴细胞，通过诱导或细胞融合途径制备B淋巴细胞永生化细胞系，从而进一步探讨人源化抗体的体外免疫途径。 探讨人源化抗体体外免疫途径的前提是制备能够体外培养并长期传代的B淋巴细胞系，为此分离、纯化、培养B淋巴细胞是达到上述目标的重要研究内容。近年来国内外有关上述问题研究报道不是很多，但也取得了一些重要的研究成果。 Saito 等发现扁桃体腺样体切除术对于哮喘及变应性鼻炎等有治疗作用，扁桃体中未分化的B 淋巴细胞 ( CD20 +) 数量巨大，所占比例为71.2 %，而单个核细胞仅为15. 5 %，因此从扁桃体获得人源B淋巴细胞无疑是一个成本较低途径； 扁桃体作为次级淋巴器官，不仅含有大量B淋巴细胞，也有T淋巴细胞、浆细胞、上皮细胞、巨噬细胞、朗哥汉细胞等，为得到纯化的B淋巴细胞，近年来人们探索了一些卓有成效的方法，如利用E玫瑰花反应原理和用密度梯度离心法去除T淋巴细胞，用EBv转化B淋巴细胞永生化等。 综上所述，人体扁桃体B淋巴细胞分离及体外培养技术，在人源化抗体制备和免疫学基础研究中具有重要科学意义，是探索人源化单克隆抗体制备新途径的基础工作。 Xiaocong Yu, Patricia A. McGraw, Frances S.et.al. An optimized electrofusion-based protocol for generating virus-specific human monoclonal antibodies. J Immunol Methods. 2009 July 31. Martina Wiesner, Caroline Zentz, Christine Mayr,et.al. Conditional Immortalization of Human B Cells by CD40 Ligation.PLoS ONE.2008; 3(1): 1464. Ling NR. Immunoglobulin production by cultured human lymphocytes .J Immunol Methods, 2000,238, 238 (1-2) :3-15 . Tangye SG, Avery DT,Hodgkin PD. A division-linked mechanism for the rapid generateon of Ig-secreting cells from human memory B cells .J Immunol, 2003,170, 170 (1) :261-269 . Avery DT, Ellyard JI,Mackay F,et al. Increased expression of CD27 on activated human memory B cells correlates with their commitment to the plasma cell lineage .J Immunol, 2005,174, 174 (7) :4034-4042 . 现有研究基础 近年来本实验室开展了胃癌细胞、狂犬病毒单克隆抗体研究工作，查阅了大量有关淋巴细胞分离、纯化、细胞融合、融合细胞体外培养