半胱亚磺酸脱羧酶和牛磺酸转运体mRNA在成年小鼠睾丸间质细胞的表达.pdfVIP

动物医学进展。2013，34(3)：48—51 ProgressinVeterinaryMedicine 半胱亚磺酸脱羧酶和牛磺酸转运体 mRNA 在成年小鼠睾丸间质细胞的表达 张柳平 ，潘耀谦 ，邵根 宝 (1．江苏大学基础医学与医学技术学院，江苏镇江 212013；2．河南科技学院动物科学学院，河南新乡 453003) 摘 要：为检测成年小鼠睾丸间质细胞是否存在牛磺酸生物合成关键酶半胱亚磺酸脱羧酶(CSD)和牛 磺酸转运体 (TauT)mRNA的表达 ，通过 Percol1分离液分离纯化成年小鼠睾丸间质细胞 ，运用 RT—PCR方 法测定睾丸间质细胞 中CSD和TauTmRNA表达情况。结果显示，成年小鼠睾丸间质细胞存在 CSD和 TauTmRNA表达。说明成年小鼠睾丸间质细胞能通过 CSD途径合成牛磺酸以及睾丸间质细胞可能存在 牛磺酸 的转运活动 。 关键词：成年雄小鼠；睾丸间质细胞；半胱亚磺酸脱羧酶mRNA；牛磺酸转运体mRNA 中图分类号 ：$852．21 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—5038(2013)03—0048—04 牛磺酸是一种含硫 G一氨基酸 ，是动物组织中含 fledEagleSmedium)、F12(Ham SF12medium)和 量最丰富的 自由氨基酸L1]。研究表明，牛磺酸存在 胎牛血清购 自Sigma公 司；Percol1分离液 购 自 于雄性生殖器官，如大鼠睾丸间质细胞 、睾丸的血管 Pharmacia公司，工型胶 原酶购 自Gibco公司，总 内皮细胞和其他 间质细胞 ，以及输 出管 的上皮细 RNA分离试剂盒购 自Invitrogen公司，RT—PCR检 胞 ，并且以高含量存在于精子 和精液中嘲。牛 测所需试剂购 自Promega公司。 磺酸作为一种最主要的游离氨基酸在雄性生殖系统 1．1．2 实验动物 试验采用清洁级 昆明种系 6O日 具有重要作用，如抗氧化L6]、调节渗透压[7]、精子获 龄雄小 鼠。饲养条件为人工控温 22℃～24℃，照 能 以及促进精子活力[911]等。牛磺酸所具有的这 明：黑暗时间为 12h：12h。自由饮水采食 。 些生物学效应依赖于它的细胞 内浓度，此浓度取决 1．2 方法 于细胞 通过半胱 双氧酶 (cysteinedioxygenase， 1．2．1 睾丸间质细胞 的分离和纯化 按文献[14] CDO)和半胱亚磺酸脱羧酶 (cysteinesulfinatede- 的方法操作 。无菌取 60日龄小 鼠睾丸，在冰面上去 carboxylase，CSD)自身合成牛磺酸的能力及通过牛 除被膜和血管。DMEM ／F12培养液漂洗后 ，用镊子 磺酸转运体 (taurinetransporter，TauT)从细胞外转 将睾丸实质拨散 ，0．5g／L 工型胶原酶 34。C震荡 运牛磺酸 的能力n引，而 CSD被认为是牛磺酸生物合 消化 30min，4倍培养液终止消化后，用 200 目和 成途径中的限速酶[1。 400目筛网过滤，滤液 1500r／min离心 10min，弃 尽管牛磺酸在雄性生殖系统具有重要作用，但 上清。细胞沉淀用 2mLDMEM ／F12培养液稀释 关于 CSD和 TauT的研究大多集中于生殖系统之 后 ，将细胞悬液加于 4个密度梯度的Percol1分离液 外的组织 ，睾丸间质细胞作为合成睾酮的最主要细 上 (由试 管 底部 向上 依次 为 60 、37 、26 、 胞是否存在 CSD和 TauT的共表达未见报道。因 21％)，4℃ 3000r／min离心 30min。收集 37 和 此，本研究拟用 RT—PCR方法检测分离纯化的成年 6O 之间的细胞 ，DMEM／F12稀释后 ，1500r／min 小鼠睾丸间质细胞中CSD和 TauTmRNA表达情 离心 10min，沉淀加入含胎牛血清的培养液，摇 匀。 况 。 细胞存活率用台盼蓝染色排除法