单抗介导的免疫组化检测AFB1及在雏鸭感染AFB1致病机理中的初步应用.pdfVIP

第六届理事会第二次会议重教学专业委员会2006年会议论文集 3．3对于雏鸭免疫保护试验，从攻毒后死亡率及心、肝、脑细菌分离情况看，重组蛋白 免疫组及全菌灭活苗组免疫保护效果相同；从肝、心包、气囊平均病变等级看，全菌灭活苗 免疫组病变程度重于重组蛋白免疫组。分析得知重组蛋白苗及全菌灭活苗免疫均具有一定的 免疫保护效果，重组蛋白免疫效果优于全菌灭活苗免疫。这是因为重组蛋白免疫组鸭产生了 较高的抗菌毛抗体，ELISA效价达1：1600，菌毛抗体在细菌入侵的初始阶段与其菌毛上的 受体结合位点相结合，阻断了大量细菌的感染；而全菌灭活苗免疫组可能由于菌体上的菌毛 刺激机体产生的抗体水平低于重组蛋白免疫组，导致其病变程度稍重。可见，通过I型菌毛 pilA基因的表达产物对雏鸭进行免疫，可以保护雏鸭抵抗同源菌株的攻击。目前，对l型菌 的菌株进行体外培养，提取菌毛，制成菌毛油乳苗，对鸡进行免疫，制备的疫苗可不同程度 地保护鸡抵抗大肠杆菌的攻击，但因体外培养，I型菌毛表达与否及产量高低，受多种因素 的影响，导致其成本太高，不是制造大肠杆菌疫苗的理想方法；重组蛋白基因工程亚单位苗 具有高产量，可稳定表达等优点，因此基因工程亚单位苗在实际生产中具有更广泛的应用前 景，对防制禽大肠杆菌病具有重要意义。 3．4用建立的ELISA方法对免疫鸭、攻毒鸭血清效价进行检测，免疫鸭血清抗体效价达 1：1600；攻毒组鸭，其血消抗体呈阴性，但其OD值高于同一稀释度的阴性血清。攻毒鸭 血清抗体虽呈阴性，但OD值高于同一稀释度的阴性血清，可能为攻毒菌所表达的茵毛刺激 机体产生了少量的菌毛抗体，此抗体可与纯化蛋白相结合，因血清为鸭攻毒后7天采血制备， 所产生的抗体水平较低。由此推断可用建立的ELISA方法对鸭血清进行检测，判断鸭是否 感染表达I型茵毛的致病性大肠杆菌，从而建立诊断致病性大肠杆菌感染的ELISA方法。 参考文献略 单抗介导的免疫组化检测AFBl及在雏鸭感染AFBl 致病机理中的初步应用 刘艳丽12，汪铭书12，程安春1p，胡骑”，陈孝跃1·2 (1．四川农业大学动物科技学院禽痛研究中心，四川，雅安，625014； 2．动物疫病与人类健康四川省重点实验室，四川，雅安，625014) 96、120、144、168、192小时各剖杀2只，观察并取心、肝、脾、肺、肾、脑、十二指肠、胰腺等组织． 用抗AFBI单克隆抗体建立了检测石蜡切片中AFBI的免疫组织化学技术并应用于AFB!实验感染雏鸭后 的检测及毒素在细胞中的定位研究，获得如下结果：用抗AFBI单克隆抗体建立了免疫组织化学技术检测 石蜡切片中黄曲霉毒素的方法，谊法特异性强，能对AFBl在机体组织器官内的分布进行准确定位．检测 AFBI在雏鸭组织中的结果为：首先在肝脏和肾脏中检测到AFBI，随后在脾脏、胰腺、十二指肠、心脏及 法氏囊检测到，其中肝脏和肾脏的阳性结果最强．AFBI主要分布于肝脏肝窦及汇管区周围炎性反应带的 肝细胞，肾脏肾小管、集合管上皮细胞以及肾小球毛细血管，脾脏白髓及炎性细胞，胰腺腺上皮细胞，十 二指肠脱落的黏膜上皮细胞，心脏血管周围和心脏发生空泡变性的心肌纤维中．AFBl主要集中于细胞核 内，而细胞膜和细胞浆内也有少量的分布． 关键词：黄曲霉毒素感染雏鸭免疫组化分布规律 ·程安春和汪铭书为通讯作者 flavus)、寄生曲霉 黄曲霉毒素(Aflatoxin，AF)是一组由黄曲霉(Aspergillus (A．parasiticus)等霉菌所产生的，被世界公认的分布广、毒性最强、致癌力最强、危害最 大的毒素之一。尽管经过几十年的研究，黄曲霉毒素的化学结构、性质、对人畜的损害已研 究得比较透彻，世界各国也对其在食品种的污染进行了严格的规定，采取了各种管理办法， 但并没有得到有效的控制，据世界粮农组织(FA∞报告，全球每年约有2％的农作物因污染 严重而失去营养和经济价值，近年进出口商品中均有发现黄曲霉毒素超标现象，近年来全世 界每年平均有数十万只家禽和家畜因黄曲霉毒素中毒而死亡。 ．495．． 禽类传染病 目前研究黄曲