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红外分光光度法培训 2015.08.14 红外分光光度法是在4000～400cm-1波数范围内测定物质的吸收光谱,用于化合物的鉴别、检查或含量测定的方法。除部分光学异构体及长链烷烃同系物外,几乎没有两个化合物具有相同的红外光谱,据此可以对化合物进行定性和结构分析;化合物对红外辐射的吸收程度与其浓度的关系符合朗伯-比尔定律,是红外分光光度法定量分析的依据。 红外吸收光谱法分类 ●近红外区 波长0.76～2.5μm，波数13158～4000cm-1 ●中红外区 波长2.5～25μm，波数4000 ～ 400cm-1 ●远红外区 波长25 ~1000μm，波数400～10cm-1 特征区和指纹区 特征区： 4000~1300cm?1 化学键和基团的特征振动频率区，吸收峰较稀疏，易辨认，每一个吸收峰都和一定的基团相对应，一般可用于鉴定官能团的存在。 指纹区： 1300~400cm?1 吸收峰的特征性强，可用于区别不同化合物结构上的微小差异。吸收峰强度和位置相似，相互干扰较大，再加上各种弯曲振动的能级差小，吸收峰密集、复杂多变、不容易辨认。 区域 吸收峰类型 作用 特征 特征区 4000-1300cm-1 氢单键的伸缩振动峰 ①确定化合物具有哪些基团； ②确定化合物的类别 吸收峰比较稀疏，容易辨认 各种叁键、双键的伸缩振动峰 部分氢单键的面内弯曲振动峰 指纹区 1300-400cm-1 各种单键的伸缩振动峰 ①某些特征峰及大量相关峰作为确定基团的旁证； ②确定化合物的细微结构 吸收峰密集、多变且复杂，能够反映各化合物小差异，可与标准图谱或已知物谱图进行对比分析 多数基团的面外弯曲振动峰 两区域法的分区及其作用 傅里叶变换红外光谱仪组成 （IR） 光学台 （包括光源、干涉仪、样品室和检测器） 记录装置 数据处理系统 红外光谱仪就是记录以等间隔波数为横坐标、吸光度或透过度为纵坐标表示的谱图即为红外光谱图。 傅里叶变换红外光谱仪原理图 红外光谱仪的校正 波数准确度 用聚苯乙烯薄膜(厚度约为0.04mm)校正仪器,在4cm-1的分辨率下绘制其光谱图,用3027cm-1，2851cm-1，1601cm-1，1028cm-1，907cm-1处的吸收峰对仪器的波数进行校正。红外光谱仪(傅里叶变换)在3000cm-1附近的波数误差应不大于±5cm-1，在1000cm-1 附近的波数误差应不大于±1cm-1。 红外光谱仪的校正 分辨率 用聚苯乙烯薄膜校正时,仪器的分辨率要求在3110～2850cm-1范围内应能清晰地分辨出7个峰,峰2851cm-1与谷2870cm-1 之间的分辨深度不小于18%透光率, 峰1583cm-1与谷1589cm-1 之间的分辨深度不小于12% 透光率。仪器的标称分辨率,除另有规定外,应不低于2cm-1。 聚苯乙烯薄膜标准红外光谱图 供试品的制备方法 在药物分析中,通常测定的都是透射光谱,通常采用压片法、糊法、膜法、溶液法和气体吸收法等。 供试品的制备方法 压片法 取供试品约1～1.5mg,置玛瑙研钵中,加入干燥的溴化钾或氯化钾细粉约200 ～ 300mg (与供试品的比约为200：1)作为分散剂,充分研磨混匀,置于直径为13mm 的压片模具中,使铺展均匀,抽真空约2min,加压至(0.8×106)kPa (约8 ～ 10T/cm2),保持压力2min,撤去压力并放气后取出制成的供试片,目视检测,片子应呈透明状,其中样品分布应均匀,并无明显的颗粒状样品。亦可采用其他直径的压模制片,样品与分散剂的用量需相应调整,以制得浓度合适的片子（制成图谱的最强吸收峰透光率应在10%以下）。 供试品的制备方法 糊法 取供试品约5mg,置玛瑙研钵中,粉碎研细后,滴加少量液状石蜡或其他适宜的糊剂,研成均匀的糊状物,取适量糊状物夹于两个窗片或空白溴化钾片(每片约150mg)之间,作为供试片,另以溴化钾约300mg制成空白片作为补偿。亦可用专用装置夹持糊状物。制备时应注意尽量使糊状样品在窗片间分布均匀。 供试品的制备方法 膜法 参照上述糊法所述的方法,将能形成薄膜的液体样品铺展于适宜的盐片中,使形成薄膜后测定。若为高分子聚合物,可先制成适宜厚度的高分子薄膜,直接置于样品光路中测定。熔点较低的固体样品可采用熔融成膜的方法制样。 供试品的制备方法 溶液法 将供试品溶于适宜的溶剂中,制成1% ～ 10%浓度的溶液,灌入适宜厚度的液体池中测定。常用溶剂有四氯化碳、三氯甲烷、二硫化碳、己烷、环己烷及二氯乙烷等。选用溶液应在被测定区域中透明或仅有中至弱的吸收,且与样品间的相互作用应尽可能小。 供试品的制备方法说明