1.1、1.2 DNA重组技术的基本工具 课件 人教版选修3.pptVIP

1.（2012·福州模拟）浙江大学农学院喻景权教授的课题组最新研究发现，一种植物激素——油菜素内酯能促进农药在植物体内的降解和代谢。研究人员发现，用油菜素内酯处理后，许多参与农药降解的基因(如P450和GsT)的表达和酶活性都得到提高，在这些基因的“指导”下合成的蛋白酶能把农药逐渐转化为水溶性物质或低毒无毒物质，有的则被直接排出体外。某课题组进一步进行了如下的实验操作，请回答： （1）获得油菜素内酯基因的方法有_____________（举二项即可）。第①步用PCR技术扩增基因时用到的耐高温的酶通常是指_____________。步骤②用到的酶有_____________。 * 1.1、1.2 DNA重组技术的基本工具 基因工程的基本操作程序 一、基因工程的概念理解 1.供体：提供__________ 2.操作环境：______ 3.操作水平：__________ 4.原理：__________ 5.受体：表达目的基因 6.本质：性状在______体内表达 7.优点：克服_______________障碍，定向改造生物_____ 目的基因 体处 分子水平 基因重组 受体 远缘杂交不亲和 性状 二、DNA重组技术的基本工具 1.限制性核酸内切酶（简称：限制酶） （1）来源：主要从______生物中分离纯化出来。 （2）作用：识别特定的___________并切开相应两个核苷酸之 间的_____________。 （3）结果：产生__________或平末端。 2.DNA连接酶 （1）种类：按来源可分为E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶。 （2）作用：在两个核苷酸之间形成____________以连接_____ _________。 原核 核苷酸序列 磷酸二酯键 黏性末端 磷酸二酯键 两段 DNA片段 3.载体 （1）种类：_____、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 能__________ 有一个至多个________________ 有特殊的__________ 【点拨】提取目的基因和切割载体使用同一种限制酶，目的是 能形成相同的黏性末端，形成重组DNA分子。 质粒 自我复制 限制酶切割位点 标记基因 （2）质粒特点 三、基因工程的基本操作程序 1.目的基因的获取 （1）目的基因：编码蛋白质的______。 从_________中获取 （2）获取方法 利用_________扩增目的基因 通过__________用化学方法直接 人工合成 基因 基因文库 PCR技术 DNA合成仪 2.基因表达载体的构建——基因工程的核心 （1）由图可知载体的组成：_________、启动子、终止子、_____ _____。 （2）构建目的： ①使________在_________中稳定存在，并且可以遗传给下一代； ②使________能够表达和发挥作用。 目的基因 标记 基因 目的基因 目的基因 受体细胞 3.将目的基因导入受体细胞 （1）转化:目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持___________的过程。 （2）常用方法 ： 导入植物细胞:_____________、基因枪法、花粉管通 道法 导入动物细胞:_____________ 导入微生物细胞:感受态细胞法（或Ca2+处理法） 稳定和表达 农杆菌转化法 显微注射技术 4.目的基因的检测与鉴定 （1）_________________→目的基因的有无 （2）分子杂交技术→________________ （3）_______________→目的基因是否翻译 （4）生物性状的表达与否→目的基因是否表达（个体水平） 【点拨】启动子、终止子与起始密码子、终止密码子不同：启动 子、终止子在DNA 上,在遗传信息转录时起调控作用；而起始密码 子、终止密码子在mRNA上,在翻译时起作用,决定翻译的开始和结 束。 分 子 水 平 DNA分子杂交技术 目的基因是否转录 抗原—抗体杂交 基因工程的工具 1.与DNA相关的酶 （1）五种DNA相关酶的比较： 作用底物 作用部位 形成产物 限制酶 DNA连接酶 DNA聚合酶 DNA解旋酶 DNA (水解)酶 DNA分子 磷酸二酯键 黏性末端或平末端 DNA片段 磷酸二酯键 重组DNA分子 脱氧核苷酸 磷酸二酯键 子代DNA DNA分子 DNA分子 碱基对间的氢键 磷酸二酯键 形成脱氧核苷 酸单链 游离的脱氧核苷酸 （2）限制酶和DNA连接酶之间的关系图示： 2.作为载体的条件 条件 适应性 稳定并能复制 目的基因稳定存在且数量可扩大 有一个至多个限制酶切割位点 可携带多个或多种外源基因 具有特殊的标