第六章转录及转录后加工规范.ppt

依赖ρ因子的转录终止 非依赖ρ因子的转录终止 核酶的发现，对中心法则作了重要补充； 核酶的发现是对传统酶学的挑战； 利用核酶的结构设计合成人工核酶 。 ⑴ 修饰的化学反应： ⑵ 5′-端的修饰在核内完成，且先于中段剪切。 ⑶ 5′帽子分Cap0、Cap1、Cap2。 （一）5′-端加上帽子结构(mGpppNp—） 5′pppN… 磷酸酶 ppi 5′pN… pppG pi 5′GpppN… 甲基化酶 +CH3 m7GpppN… mRNA帽子的生理功能： ⑶ 促进某些RNA的合成。 ⑴ 帽子结构参与翻译起始，帽0结构是核糖体识别 mRNA所必需的；核糖体上有帽结合蛋白。 ⑵ 帽子结构增加mRNA的稳定性，保护mRNA防 止其受5′核酸外切酶的降解。 （二）3′-端加上多聚腺苷酸尾巴(polyA)。 ⑴ polyA的出现不依赖DNA模板。 ⑵ 加尾信号：3′-末端出现AAUAAA及下游的 GU丰富区。在两序列之间由特异的核酸内 切酶切除多余的核苷酸，然后加上poly A。 尾部修饰和转录终止同时进行。 ⑶ 3′-端修饰也在核内完成，并先于mRNA中段 的剪接。 ⑷ polyA的有无及长短是维持mRNA作为翻译模 板的活性，以及增加mRNA本身稳定性的因素。 mRNA3′-端的多聚腺苷酸化可被冬虫夏草素 （ 3′-脱氧胸苷）所阻止； 即冬虫夏草素是多聚腺苷酸化的特异抑制剂。 （三）mRNA的甲基化 真核生物mRNA分子中有许多甲基化的碱基， 主要是：N6-甲基腺嘌呤（m6A）。 二、 rRNA前体的加工 原核细胞与真核细胞的rRNA前体都需加工： 1、原核细胞 rRNA 基因与某些 tRNA 基因构成 混合操纵子。 大肠杆菌共有7个转录单位，每个转录单位 由16S rRNA、 23S rRNA、 5S rRNA及 一个或几个tRNA基因组成。 图5-10 p163 大肠杆菌 rRNA 前体加工过程 2、真核细胞 rRNA 基因为串联重复序列： 由18S rRNA、 28S rRNA、5.8S rRNA基因 组成一个转录单位，彼此被间隔区分开。 每个重复单位之间的间隔DNA序列不转 录，称为非转录间隔序列。 真核生物 5S rRNA基因也是成簇排列的， 中间隔以不被转录的区域，它由RNApol Ⅲ 转录，加工成熟后构成核糖体大亚基。 不同生物的 rRNA 前体大小不同： 哺乳动物为45S；果蝇38S；酵母37S；四膜虫35S 18S 5.8S 28S 18S-rRNA 5.8S和28S-rRNA 内含子 45S转录产物 剪 接 终产物 rDNA 基因间隔 哺乳动物细胞 rRNA 前体加工过程 tRNA前体 RNA pol Ⅲ TGGCNNAGTGC GGTTCGANNCC DNA 三、tRNA前体的加工 原核与真核tRNA基因大多成簇存在。 tRNA前体的加工包括： ⑴ 剪切内含子 ⑵ 核酸外切酶修剪3′末端，逐个切去附加序列； ⑶ 加上CCA-OH的3′末端，完成柄部结构。 ⑷ 碱基修饰 tRNA的加工酶系包括： tRNA核苷酸转移酶、RNaseP、 RNaseD、 RNaseⅢ等。 Ⅰ型：有－CCA 序列基因，原核生物绝大部分； Ⅱ型：没有－CCA序列基因，为真核生物。 tRNA基因有两种： 原核生物与真核生物都有tRNA核苷酸转移酶， 负责给Ⅱ型tRNA加上－CCA3′-OH末端， 或修复发生损伤的Ⅰ型 tRNA 3′-OH末端。 RNaseP、 RNaseD RNaseⅢ连接酶 1、剪切内含子： 属于酶促反应，需要酶及ATP。 ATP ADP tRNA核苷酸转移酶 2、加上CCA-OH的3′末端， 完成柄部结构。 5、增强子（enhancer）： 能结合反式作用因子，决定基因的时间和空间 特异性表达，增强启动子转录活性的DNA序列。 增强子作用特点： ⑴ 增强效应十分明显：使转录频率增加百倍或千倍。 ⑵ 增强效应与其所处的位置和取向无关： 增强子以5′→3′或 3′→5′排列对启动子都有作用。 ⑶ 大多为重复序列：长约50bp，适合与反式因子结合，内部常有一个核心序列，为增强效应所必需。 ⑷ 增强效应具有严密的组织和细胞特异性。 ⑸ 没有基因专一性。 ⑹ 许多增强子受外部信号的调控。 GCGC-CAA