第15章免疫细胞标志和功能检测技术试编.pptxVIP

临床免疫学检验技术 第十五章免疫细胞标志和功能检测技术 刘 辉 目 录 第一节 免疫细胞的分离 第二节 淋巴细胞标志及亚群分类 第三节 抗原提呈细胞的表面标志 第四节 淋巴细胞的功能检测 第五节 其它免疫细胞功能检测技术 第六节 免疫细胞表面标志和功能检测的临床应用 第一节 免疫细胞的分离 重点提示 外周血单个核细胞分离 淋巴细胞的分离 T、B细胞和T细胞亚群的分离 细胞分选和基本原理 细胞分选和基本原理 不同细胞密度不同 不同细胞表面生物学特性不同 不同细胞表面分化抗原不同 不同细胞密度不同 人的红细胞密度为1.093 粒细胞密度为1.092 单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的密度为1.076-1.090 用1.077±0.001的分层液可将细胞分离 密度梯度离心(Ficoll)离心 细胞表面分化抗原（CD抗原） 适用于T、B细胞的分离 已知CD抗原细胞亚群的分离 未知CD抗原细胞亚群的分离（阴性分选） 不同细胞谱系，不同细胞分化阶段，细胞表面CD抗原不同 磁珠大小可以选择 免疫磁珠法细胞分选过程 荧光激活细胞分离仪分离法 第二节 淋巴细胞标志及亚群分类 一、Ｔ细胞表面标志及亚群 CD3+CD4+CD8-辅助性Ｔ细胞（help T cell,Th） CD3+CD4-CD8+细胞毒性Ｔ细胞（cytotoxic T cell,Tc or CTL） CD4+CD25+ Foxp3+调节性Ｔ细胞（regulatory T cell,Tr or Treg） 二、B细胞表面标志 CD19、CD20、CD21、CD22和CD23等。 以CD5为标志结合CD19或CD20可将B细胞分为B1（CD19+CD5+）和B2(CD19+CD5-)两个亚群。 三、NK细胞表面标志 NK细胞表面至少存在CD2、CD16、CD56、CD69、CD94、CD96、CD158a、CD159a、CD161和CD244等多种抗原。 目前多以CD3-、CD16+、CD56+ 作为NK细胞的典型标志。 第三节 抗原提呈细胞的表面标志 抗原提呈细胞的表面标志 单核-吞噬细胞的典型的表面标志是CD14。 人成熟DC的主要特征表面标志为CD1a、CD11c和CD83，但不表达单核-吞噬细胞、T细胞、B细胞和NK细胞的典型的表面标志。 第四节 淋巴细胞的功能检测 原理： 淋巴细胞 DNA合成 分化 母细胞 刺激物 细胞变大 细胞浆扩大 核染色质疏松 核仁明显 T淋巴细胞增殖试验 2. 淋巴细胞转化的刺激物 非特异性刺激物： PHA ------ T细胞 ConA ------- T细胞 PWM ------- T、 B细胞 LPS ------- B细胞 特异性刺激物： 异种抗原 同种组织抗原 体内试验 特异性抗原皮肤试验 PHA皮肤试验 第五节 其它免疫细胞功能检测技术 吞噬细胞功能 趋化 吞噬 胞内杀灭作用 一、趋化功能检测 滤膜渗透法（Boyden 小室法） 二、白细胞吞噬功能的检测 白细胞＋菌液 37℃培养 定时取定量菌液培养 计算菌落数 三、杀菌能力的检测 中性粒细胞杀菌 耗能 代谢 生成H+ 四氮唑蓝(淡黄色) 甲簪(蓝黑色) 原理 操作 四、氮唑蓝(NBT)还原试验 抗凝血+NBT应用液 温育 推片 瑞士复染 五、巨噬细胞功能检测 (一)炭粒廓清试验 正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90%炭粒，脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒。据此给小鼠定量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液)，间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判断巨噬细胞的功能。 (二)吞噬功能检测 巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强的吞噬功能，常用鸡红细胞(CRBC)、白色念珠菌、酵母细胞等作为吞噬颗粒，用斑蟊敷贴法收集人巨噬细胞或从腹腔渗出液获得鼠巨噬细胞。 第六节 免疫细胞功能检测的临床应用 反映机体免疫功能状态。 肿瘤、免疫缺陷病等疾病的诊断和疾病预后监测。 组织器官移植后对受者的细胞免疫学功能监测则有利于排斥反应的早期发现，以便及时采取有效措施。 本章小结 淋巴细胞并不是功能单一的群体，但其在光学显微镜下的形态基本是一样的，因此要对其进行进一步的分类和观察就不能采用形态学的方法，而要依靠对其表面标志的检测。 利用细胞表面标志可以实现对各类细胞的计数。 免疫细胞功能试验包括体内和体外试验。 免疫细胞功能体外试验主要根据免疫细胞的增殖活性、分泌活性和杀伤活性等特性而进行实验设计。 本章小结 本章小结 吞噬细胞功能检测，方法有趋化功