自制鳞状细胞癌抗原单克隆抗体芯片的临床诊断效能.PDF

佩饵琢学 杂志，2013，23(4)：56～57 ◎ 2013 CHINESEJOURNALOFMICROCIRCULATION doi：10．3969／j．issn．1005—1740．2013．04．019 自制鳞状细胞癌抗原单克隆抗体芯片 的临床诊断效能评价 周齐洋 高静贤 丁俊杰 胡锡池。朱万展 ’* [中图分类号] R34 [文献标识码] A [文章编号] 1005—1740(2013)04—0056—02 司 ；AGSCCEIA试剂盒及 SCC标准品购 自FU— JIREBIO；CO2恒温培养箱 (Thermo)购 自杭州宝诚 团黧 麓 生物技术有限公司；SIXP一01全 自动芯片分析仪 由 江苏三联生物工程有限公司提供 ；酶标定量测定仪 购 自上海科华实验系统有限公司；水平及垂直电泳 仪购 自Bio—Rad公司。 1．2 方法 1．2．1 杂交瘤细胞的建立：以重组人源 SCC1蛋 白 免疫BALB／c小鼠后，取小 鼠脾脏细胞与 SP2／0骨 髓瘤细胞进行融合 ，ELISA筛选杂交瘤细胞 中的阳 性克隆建株人液氮保存 。 1．2．2 SCC1单克隆抗体 (McAb)的制备和效价测 定 ：自液氮中取杂交瘤细胞接种小 鼠，7～10天后取 腹水 ，用间接 ELISA测定腹水 中McAb效价，选择 1 材料与方法 较高效价 McAb进一步用ProteinA柱亲和层析纯 1．1 实验材料 化，SDS—PAGE电泳，并用考马斯亮蓝法 (Bradford) 1．1．1 抗原 、细胞和小 鼠：免疫源蛋 白为重组人源 测其蛋白浓度。 SCC1蛋 白，由江苏省医疗器械检验所制备 ；小 鼠骨 1．2．3 可配对 McAb筛选 ：利用间接 ELlSA进行 髓瘤细胞 SP2／0(批号 购 自上海 中科 院； 不同结合位点的McAb配对。包被上述纯化 McAb 7周龄 BALB／e小 鼠购 自苏州大学实验动物中心， (浓度为 lng／ml，包被抗体)；HRP标记 McAb(浓 证号 scxk(苏)2008—0010；SCC阳性和阴性血清 (来 度为0．2mg／ml，夹心抗体)；以SCC蛋 白标准 品作 自经病理证实的癌症患者)来源于无锡 市第二人民 为夹心抗原，采用全 自动蛋 白芯片分析仪筛选可配 医院。 对抗体 。 1．1．2 试剂及仪器 ：辣根过氧化物酶 (HRP)标记 1．2．4 SCC标准 曲线的建立及 临床血清标本检 的羊抗 鼠抗体购 自上海美季生物科技有 限公司；聚 测 ：用上述 可配对 McAb检测不 同稀 释度 的标 准 乙二醇、弗 氏不完全佐剂 、TMB显色试剂均购 自 SCC蛋 白浓度后 ，绘制标准曲线 ，并对 14例 SCC阳 Sigma公司；无支原体胎牛血清购 自浙江天杭生物 性和 80例 SCC阴性的临床血清采