微生物的实验室培养讲义.pptx

巴斯德 失败的原因：发酵物中混入了杂菌 法国，微生物学家 认识到了：保持培养物纯净的重要性。 防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。 课题1 微生物的实验室培养 1.需要为培养的微生物提供合适的营养和环境条件 2.需要确保无处不在的其他微生物无法混入 即防止杂菌污染 特点：小; 简单; 低等; 代谢速度快。 一、微生物： 是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称． 微生物 无细胞结构： 病毒 有细胞结构 原核生物: 细菌、蓝藻 原生生物： 真核生物: 单细胞的动植物 真菌: 如酵母菌 如草履虫、单细胞藻类等 二、培养基 1、概念 ：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置供出其生长繁殖的营养基质。 2、种类 （1）按物理状态分： 液体培养基 固体体培养基 半固体体培养基 （不加凝固剂琼脂 （加较多凝固剂 琼脂 （加较少凝固剂琼脂 、用于工业生产） 、用于分离、鉴定、计数、保藏等） 、用于观察运动等） 琼脂：一种从红藻中提取的多糖，在98 ℃以上熔化，在44 ℃以下凝固，在常规培养条件下呈现固态。 液体培养基： 表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长 半固体培养基： (是否运动) 无动力 有动力(弥散) 固体培养基： 菌落 单个 或少数菌体 2.特征： 大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。 3.功能： 1.定义： 菌落 鉴定菌种的重要依据 固体培养基上 大量繁殖 子细胞群体 (2）化学成分 ①天然培养基 ②合成培养基 ：含化学成分不明确的天然物质 ：培养基成分明确(用化学成分已知的化学物质配成) 、用于工业生产 用于分类、鉴定 (3）用途 ①选择培养基 ②鉴别培养基 ：添加或缺少某种化学成分, 从众多微生物中分离出所需微生物 ：加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物 选择培养基 加入青霉素的培养基 分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基 分离自养型微生物 鉴别培养基 伊红－美蓝培养基 鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈现深紫色，并带有金属光泽) 3.基本成分： 碳源、氮源、水、无机盐 ⑴碳源： 无机碳源： 有机碳源： CO2、CO32-、HCO3- 糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等 自养微生物 异养微生物 提供碳元素的物质 作用： ①构成细胞物质和一些代谢产物 ②异养微生物的能源 1.不能作为异养微生物碳源的是（ ） A．牛肉膏　B．含碳有机物 C．石油　　D．含碳无机物 D ⑵氮源： 无机氮源： 有机氮源： N2 、NH4＋、NO3- 牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等 注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源 提供氮元素的物质 （ N2:固氮菌） 作用： 主要用于合成蛋白质、核酸及含N的代谢产物。 注意： 满足微生物对pH、特殊营养物质、氧气的要求 特殊营养(生长因子）： 维生素、氨基酸、碱基等 pH、氧气的需求： 霉菌（pH调至酸性） 细菌（pH调至中性或微碱性） 厌氧生物（需提供无氧条件） 原因： 它们缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限 成分: 水、无机盐、碳源、氮源（基本成分） +满足微生物对pH、特殊营养物质、氧气的要求 思考：为什么大多数培养基都含有这四类物质？ 构成细胞的基本元素有C、H、N、O，所以培养基应该有提供C的物质（碳源）、提供N源的物质（氮源）、提供H、O的物质（H2O） 组成细胞的大量元素中，除了C、H、N、O外，还有P、S、K、Ca、Mg等，所以培养基中应该还含有提供P、S、K、Ca、Mg的物质（无机盐） 二.无菌技术： 1. 概念 ：泛指培养微生物操作中，所有防 止杂菌污染的方法。 2. 目的： ①防止外来杂菌的污染 ②有效避免操作者自身被微生物感染 3.无菌范围： ①实验操作空间、操作者的手、衣着进行清洁和消毒 ②用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作过程应在酒精灯火焰附近进行 ④避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触 消毒： ①煮沸消毒法： 使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子） 100℃煮沸5-6min ②巴氏消毒法： 70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min 不耐高温的液体 如牛奶 ③化学药剂 用75%酒精擦拭双手 氯气消毒水源 ④紫外线消毒 接种室、接种箱或超净工作台在使用前，可以用紫外线照射30min，可以杀死物体表面或空气中的微生物。在照射前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒，可以加强消毒效果。 灭菌： ①灼烧灭菌： 使用强烈的理化因素杀死物体内外所有