血库技术操作规程教材.docVIP

ABO血型正定型操作规程 原理 根据红细胞表面有无A抗原和（或）B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正定型鉴定ABO血型。正定型用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或（和）B抗原。 2、 试剂 2.1 抗A、抗B血型定型试剂，有批文准号。 2.2 受检者3~5%红细胞盐水悬液。 3、 操作 3.1 试管法 3.1.1 取洁净小试管2支，分别标明抗A、抗B，用滴管分别滴加抗A、抗B分型试剂各一滴于试管底部，再用滴管分别加入受检者3~5%红细胞盐水悬液1滴混匀。 3.1.2 立即以1000r/min离心1分钟。 3.1.3 将试管从离心机取出，轻轻摇动试管，使沉于管底的红细胞 浮起，先以肉眼观察有无凝集或溶血现象。如肉眼未见凝集，应将反应物倒于玻片上，以低倍镜观察。 3.1.4 观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于 A、B亚型、类B或cisAB的发现。 3.1.5 凝集强度判断标准 4+：红细胞凝集成一大块，血浆清晰透明。 3+：红细胞凝集成数小块，血浆尚清晰。 2+：红细胞凝块分散成数小块，周围可见到游离红细胞。 1+：肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞 ±：镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。 MF：即混合凝集外观，是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散分布。 —：镜下未见凝集，红细胞均匀分布。 3.2 玻片法 3.2.1 取清洁玻片一张（或凹玻板），用记号笔划成方格，标明抗A、抗B，分别滴加抗A、抗B血清一滴于相应的方格内，再加受检者5%红细胞悬液一滴混匀。 3.2.2 将玻片（或凹玻板）不断轻轻转动，使血浆与细胞充分混匀，连续1~5分钟，肉眼观察有无凝集或溶血反应，再在低倍镜下观察结果。 ABO血型反定型操作规程 原理 用已知的A1、B细胞测定被箭血清中有无相应的抗A或抗B抗体，结合正定型结果判断ABO血型。 试剂 为成熟市售标准红细胞，主要组成组分为：A1、B型红细胞，葡萄糖、枸橼酸、核苷酸、抗生素等。 样本要求 被检血清或血浆。 4、 操作（试管法） 4.1 取被检者血清（血浆）各1滴分别加于2支标记好的小试管中； 4.2 分别各加A1、B试剂红细胞； 4.3 混匀后离心，1000rmp离心1分钟或者3400rmp离心15秒； 4.4 先观察是否溶血（溶血或是阳性结果，或是细菌污染），再轻轻摇晃，使红细胞再悬浮起来； 4.5 观察是否有凝块，记录结果。如可疑可借助显微镜观察凝集情况。 5、结果判断 正定型 反定型 血型 抗A试剂 抗B试剂 A1细胞 B细胞 + — — + A — + + — B — — + + O + + — — AB 6、方法的局限性 反定型试验必须与正定型一起进行，正反定型不一致必须做进一步研究。单独的反定型结果不能作为判断血型的依据。 RHD(IgM)血型定型操作规程 原理 应用红细胞凝集试验检测红细胞抗原。RH（D）血型是由红细胞表面存在或缺失D抗原确定。RH血型用临床上抗原性最强的D抗原作血型鉴定，凡是带有D抗原者称为RH阳性，不带D抗原者称为RH阴性 D抗原与细胞株BS226细胞产生的单克隆抗体发生特异性反应。 试剂 市售成熟RHD(IgM)血型定型试剂。 样品要求 应使用新鲜、非溶血标本，可以是未加抗凝剂的血液标本，或者是用EDTA或枸橼酸抗凝的血液标本。必要时应用等渗盐水加入经过洗涤两遍以上的红细胞悬液。严重脂血、黄疸或微生物污染过的标本可能导致结果判断错误。 操作 4.1 试管法 4.1.1 用等渗盐水配制3~5%的红细胞悬液； 4.1.2 在相应标记好的试管中分别加1滴试剂和1滴红细胞悬液； 4.1.3 1000rmp离心2分钟或3000rmp离心20秒； 4.1.4 轻轻震荡，悬浮沉积细胞，观察凝集结果； 4.1.5 若反应为阴性、弱阳性或可疑，200C孵育15分钟； 4.1.6 1000rmp离心2分钟或3000rmp离心20秒； 4.1.7 轻轻震荡，悬浮沉积细胞，观察凝集结果； 4.1.8 出现凝集为阳性，未出现凝集为阴性。 4.2 纸卡法 4.2.1 在一块纸卡凹孔中滴1滴试剂； 4.2.2 加1滴等体积全血，混匀； 4.2.3 轻摇纸卡，观察凝集结果； 4.2.4 出现凝集为阳性，未出现凝集为阴性。 5、结果判断 反应强度 凝集 4+ 强反应，单一凝集块，无游离红细胞 3+ 强反应，几个大的凝集块，无游离红细胞 2+ 很多小的凝集块中混