生物物理作业（副本）.docVIP

第一次作业 1、什么是生物物理学？ ：生物物理学是研究生命物质的物理性质、生命过程的物理和物理化学规律以及物理因素对生物系统作用机制的科学。 2. 为何蛋白质的含氮量能表示蛋白质相对量？实验中又是如何依此原理计算蛋白质含量的？ ：因为蛋白质中N含量平均为16%，所以可以用蛋白质的含氮量表示蛋白质相对量。实验中是用凯氏定氮法测定蛋白质含量，100克样品中蛋白质含量=每克样品中含氮克数*6.25*100 3、解释 “氨基酸等电点不是中性点”这句话的含义。 氨基酸是两性电解质，氨基酸处于静电荷为零时的pH为该氨基酸的等电点。不同氨基酸的等电点不一样，中性氨基酸的酸性比它的碱性稍强些。在纯水溶液中，中性氨基酸呈微酸性，负离子浓度大于正离子浓度。故使其到等电点，需加酸，降低pH值。中性氨基酸等电点为5.6~6.3，酸性氨基酸等电点为2.8~3.2；碱性氨基酸等电点为7.6~10.8。 4、组成蛋白质的氨基酸的有多少种？如何进行分类？ 组成蛋白质的氨基酸有20种。根据氨基酸的相对位置，可以分为α氨基酸、β氨基酸、γ氨基酸等等；根据酸碱性可以分为中性氨基酸、酸性氨基酸和碱性氨基酸。146个氨基酸残基组成的β亚基。各个亚基间相互作用与接触部位的布局所形成的立体排布，它们之间以非共价键（包括氢键、疏水作用和盐键等）相连结 6、举例说明蛋白质的变构效应 答：T型H b分子第一个亚基与O2结合，引起构象变化，并引起第二、三、四个亚基与O2的亲和力依次增高，H b分子构象由T型变为R型。 H b随红细胞有血循环中往返于肺（氧分压高，T型转变为R型）及其它组织（氧分压低，R型转变为T型）之间，H b的T型与R型 不断变化。 7、什么是超二级结构和结构域 答：在蛋白质结构中，常常发现两个或几个二级结构单元被连接多肽连接起来，进一步组合成有特殊的几何排列的局部空间结构，这些局域空间结构称为超二级结构。 结构域：由几个motifs结合排列或由一条长的多肽链折叠形成蛋白质亚基结构中的紧密球状的结构区域，它也是蛋白质的一个功能单位。 8下载至少一种蛋白质的PDB。使用PDB viewer 等软件观察蛋白质的特点 生物物理第三次作业 1.常用的蛋白质分离纯化方法有哪几种？各自的原理是什么？ 答:①根据分子大小不同的纯化方法 蛋白质分子最明显的特征之一就是颗粒大,并且不同的蛋白质分子在分子大小方面是不同的,因此可以利用一些简便的方法使蛋白质和小分子的物质分开,并使蛋白质混合物也得到分离。a：透析和超过滤 透析是利用蛋白质分子不能透过半透膜地性质,使蛋白质和其他小分子物质如无机盐,单糖,等分开. 超过滤是利用压力或离心力,强行使水和其他小分子溶质通过半透膜,而蛋白质被截留在膜上,以达到浓缩和脱盐的作用。b：凝胶过滤也称凝胶渗透层析是根据蛋白质分子大小不同分离蛋白质最有效的方法之一。凝胶过滤的原理是当不同蛋白质流经凝胶层析柱时,比凝胶珠孔径大的分子不能进入珠内网状结构,而被排阻在凝胶珠之外,随着溶剂在凝胶珠之间的空隙向下运动并最先流出柱外;反之,比凝胶珠孔径小的分子后流出柱外。目前常用的凝胶有交联葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶等。② 利用溶解度差别的纯化方法 影响蛋白质溶解度的外部条件有很多,比如溶液的pH值、离子强度、介电常数和温度等。但在同一条件下,不同的蛋白质因其分子结构的不同而有不同的溶解度,根据蛋白质分子结构的特点,适当地改变外部条件,就可以选择性地控制蛋白质混合物中某一成分的溶解度,达到分离纯化蛋白质的目的。常用的方法有等电点沉淀和pH值调节、蛋白质的盐溶和盐析、有机溶剂法、双水相萃取法、反胶团萃取法等。a. 等电点沉淀和pH值调节是最常用的方法。每种蛋白质都有自己的等电点,而且在等电点时溶解度最低;相反,有些蛋白质在一定pH值时很容易溶解。因而 可以通过调节溶液的pH值来分离纯化蛋白质。b. 蛋白质的盐溶和盐析是中性盐显著影响球状蛋白质溶解度的现象,其中,增加蛋白质溶解度的现象称盐溶,反之为盐析。 c.有机溶剂提取法的原理是:与水互溶的有机溶剂(如甲醇、乙醇)能使一些蛋白质在水中的溶解度显著降低;而且在一定温度、pH值和离子强度下,引起蛋白质沉淀的有机溶剂的浓度不同,因此,控制有机溶剂的浓度可以分离纯化蛋白质 ③。根据电荷不同进行分离纯化 根据蛋白质的电荷即酸碱性质不同分离蛋白质的方法有电泳和离子交换层析两类。a.电泳 在外电场的作用下,带电颗粒(如不处于等电点状态的蛋白质分子)将向着与其电性相反的电极移动,这种现象称为电泳。b. 聚丙烯酰胺电泳是一种以聚丙烯酰胺为介质的区带电泳,常用于分离蛋白质。c. 等电聚焦是一种高分辨率的蛋白质分离技术,也可以用于蛋白质的等电点测定。利用等电聚焦技术分离蛋白质混合物是在具有pH