芦丁提取讲义-to同学 -2016-05-23芦丁提取讲义-to同学 -2016-05-23.docVIP

PAGE  PAGE 5 芦丁的提取、精制和鉴定 §1实验目的 掌握多功能提取浓缩机组工作原理 熟悉多功能提取浓缩机组使用方法 掌握黄酮类化合物的提取、精制、鉴别原理及方法 掌握紫外可见分光光度法测定物质含量的原理和方法 熟悉红外光谱仪进行化合物结构表征的原理和方法 §2实验原理 槐花米为一常用中药，为豆科植物槐（Sophora japonica L.）的干燥花蕾，自古作为止血药，具有清肝泻火、治疗肝热目赤、头痛眩晕的功效，治疗子宫出血、吐血、鼻出血。槐花米中主要含有黄酮类成分，其中芦丁的含量高达12-20%，另含有少量的皂苷。 芦丁亦称芸香苷，有减少毛细血管通透性的作用，临床上主要为防治高血压的辅助治疗药物，此外芦丁对于放射线伤害所引起的出血症亦有一定作用。其广泛存在于植物中，现已发现含有芦丁的植物有70多种，其中以槐花米和荞麦叶含量较高，可作为提取芦丁的原料。 槐花米中已知主要成分的结构和性质： 芦丁（rutin）：C27H30O6?3H2O淡黄色针状结晶，（25℃）Mp：177~178℃，无水物的Mp：188-190℃，214~215℃ 发泡分解。溶解度：热水（1：200），冷水（1：8000），热乙醇（1：30），冷乙醇（1：300），微溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等溶剂。易溶于碱液，呈黄色，酸化后又析出，可溶于硫酸和盐酸，呈棕黄色，加水稀释又可析出。 槲皮素（quercetin）：C15H10O7?2H2O黄色结晶，Mp：313~314℃，无水物的Mp：316℃，溶解度：热乙醇（1：23），冷乙醇（1：290），可溶于吡啶、乙酸乙酯、甲醇、丙酮、冰醋酸等溶剂，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚和水。 本实验是利用芦丁分子中在碱性水中溶解度大，以碱性水为溶剂加热提取，提取液过滤浓缩后加酸，酸化后芦丁的溶解度降低而析出，从而达到提取的目的，利用芦丁对冷水和热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制，并通过黄酮类化合物的特征反应和红外光谱法进行鉴别。 分光光度法测定原理：它既能进行定性又能进行定量测定，它是根据物质对紫外区域的光或可见光的选择吸收性，进行物质定性、定量分析的一种方法。分光光度发测定物质含量的条件主要是显色反应的条件和测量吸光度的条件。显色反应的条件有显色剂用量、介质的酸度、显色时溶液的浓度、显色时间等；测量吸光度的条件包括应选择的入射光波长、吸光度范围和参比溶液等。 黄酮类化合物在碱性介质中与硝酸铝作用后，生成黄酮的铝盐络离子（低浓度为浅红色），呈黄色，可通过紫外-可见分光光度法定量测定黄酮类物质的含量。 §3试剂与仪器 试剂：槐花米、 镁粉、α-萘酚、蒸馏水、 硼砂、盐酸、浓硫酸、乙醇、三氯化铝、芦丁标准品、NaOH、NaNO2、Al(NO3)3 仪器：多功能提取浓缩机组、烧杯、新华层析滤纸、电炉、玻棒、电子天平、抽滤瓶、布氏漏斗、真空泵、烘箱、红外光谱仪、紫外-可见分光光度计。 §4实验步骤 1. 取槐花米500 g，置于提取罐中，加0.4%硼砂水15L（设定提取加热温度105度，提取物料温度80度）。加热提取90分钟，将提取液泵入浓缩罐中，药渣重复提取一次（60分钟），两次提取液在浓缩罐中进行浓缩，60分钟后将浓缩液放出至适当容器中。将浓缩液用6M盐酸调pH 4左右，放置过夜，加入尼泊金等待芦丁粗品慢慢析出。 2. 将提取液抽滤（过滤），得到粗芦丁用少量水洗3-4次，放置烘箱中干燥得粗芦丁，称重。 3. 取粗芦丁2g，加400 mL蒸馏水，煮沸至芦丁全部溶解，趁热立即抽滤，放置冷却。 4、冷却后即可析出沉淀，抽滤得芦丁精制品。 5. 芦丁的检测：分别取芦丁精制品少许（20mg），加乙醇5 mL使溶解，作以下试验。 ① 三氯化铝纸片反应：在一张滤纸条上滴加芦丁醇溶液后，加1％三氯化铝乙醇溶液两滴，于紫外光灯下观察荧光变化，记录现象。 ② 盐酸-镁粉反应：取样品溶液少量与试管中，加入金属镁粉少许，盐酸２－３滴，观察并记录颜色变化。 ③ Molish反应：取样品溶液1-2mL,加等体积10%α-萘酚溶液，摇匀，倾斜试管，沿管壁滴加浓硫酸1-2 mL，静置，观察溶液交界处的颜色变化。 芦丁的红外检测: 取芦丁精制品少许，用红外光谱仪器两种模式分别进行检测。 7、提取液中芦丁的含量测定： （1）标准溶液的制备：取芦丁对照品100mg，精密称定，置500mL容量瓶中，加60%乙醇约10mL，置水浴上微热使溶解，放冷，加60%乙醇至刻度，摇匀，即得（每1mL中含芦丁0.2 mg）。（6个组共用1瓶） （2）其它溶液配制： 5%NaNO2溶液：精密称取NaNO2固体5 g于100mL容量瓶中，加少量水使其完全溶解，定容至刻度。（3个组共用1瓶） 10%Al(NO3)3溶液：精密称取Al(NO3)