藻胆蛋白的生物合成与光谱分析___张阳杰藻胆蛋白的生物合成与光谱分析___张阳杰.docVIP

综合实验：藻胆蛋白α亚基生物合成及光谱分析 PAGE  PAGE 0 第 页 共  NUMPAGES 16 页 藻胆蛋白α亚基生物合成及光谱分析 报告题目藻胆蛋白α亚基生物合成及光谱分析作者姓名张阳杰班级学号2011114020525指导教师 苏平完成时间2014.3 生物学实验教学中心 综合实验：藻胆蛋白α亚基生物合成及光谱分析 PAGE 12 目 录  HYPERLINK \l _Toc350358680 引言3  HYPERLINK \l _Toc350358681 1. 实验仪器与试剂5  HYPERLINK \l _Toc350358682 1.1 实验仪器 PAGEREF _Toc350358682 \h 5  HYPERLINK \l _Toc350358683 1.2 实验材料及试剂5  HYPERLINK \l _Toc350358684 1.2.1 实验材料5  HYPERLINK \l _Toc350358685 1.2.2 抗生素储备液5  HYPERLINK \l _Toc350358686 1.2.3 IPTG储备液6  HYPERLINK \l _Toc350358687 1.2.4 缓冲液6  HYPERLINK \l _Toc350358688 1.2.5 SDS电泳溶液6  HYPERLINK \l _Toc350358689 2. 实验方法7  HYPERLINK \l _Toc350358690 2.1菌种活化与扩大培养7  HYPERLINK \l _Toc350358691 2.2藻胆蛋白α亚基生物合成8  HYPERLINK \l _Toc350358692 2.3藻胆蛋白α亚基提纯8  HYPERLINK \l _Toc350358693 2.4色素蛋白电泳检测8  HYPERLINK \l _Toc350358694 2.5藻胆蛋白α亚基光谱测定9  HYPERLINK \l _Toc350358695 3. 结果与分析9  HYPERLINK \l _Toc350358696 3.1藻胆蛋白α亚基产物图9  HYPERLINK \l _Toc350358697 3.2藻胆蛋白α亚基光谱图10 3.3透析后藻胆蛋白α亚基光谱图11  HYPERLINK \l _Toc350358698 4. 实验讨论12 参考文献13 藻胆蛋白α亚基生物合成及光谱分析 张阳杰（指导老师：苏平） （湖北师范学院生命科学学院 生物技术 1105班 湖北黄石 435002） 摘要：本实验通过构建质粒来实现在大肠杆菌内合成具有活性的α—PEC。藻胆蛋白(包括本文研究的α—PEC)在蓝藻内的作用是吸收光、传递能量至光合作用反应中心，所以本实验检验重组是否成功主要检验吸收光谱是否与天然藻胆蛋白一致。 藻胆蛋白(Phycobiliprotein)是存在于蓝藻、红藻和隐藻中的一类捕光色素蛋白，可分为藻红蛋白(简称PE)，藻蓝蛋白(简称PC)，别藻蓝蛋白(简称APC)和藻红蓝蛋白(简称PEC)。重组有藻胆蛋白（本实验只做藻红蛋白）基因的E. coli BL21，在含有kana（24 μg/ml）和氯霉素（40.8μg/ml）的LB培养基中培养。当OD600达到0.5-0.6时，用终浓度为1 mmol/L的异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导培养2.5小时。加超声缓冲液后用超声破壁离心取上清，得到藻红蛋白粗提液。通过镍-亲和层析对起进行纯化。 关键词：藻胆蛋白 重组质粒 光谱分析 引言 藻胆蛋白(Phycoerythrocyanin) 是一类结构相似的色素蛋白。它是由藻胆色素通过和相应的脱辅基蛋白中保守性半胱氨酸的巯基以硫醚键共价结合形成的。 藻胆色素是一类线性四吡咯化合物（分子量约600Da）。藻胆体中一般含有300～800个共价偶联的藻胆色素。与蓝藻藻胆蛋白结合的色素有4种。这四种色素分别是：藻红胆素（phycoerythrobilin，简称PEB）主要存在于PE中，藻蓝胆素（phycocyanobilin，简称PCB）主要存在于PC，APC和PEC中，藻尿胆素（phycourobilin，简称PUB）主要存在于B-PE和R-PE中，藻紫胆素（phycoviolobilin，简称PVB）仅存在于PEC中。 根据色素种类及其与藻胆蛋白的相互作用，藻胆蛋白可分为藻蓝蛋白（phycocyanin，简称PC）、藻红蛋白（phy