专题29基因工程选编.pptx

专题29 基因工程 高考生物 考点1 基因工程的工具与操作程序 一、基因工程的工具 1.限制酶 (1)存在:????原核生物????中。 (2)作用:????识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列????,并使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的????磷酸二酯键????断开。 (3)形成 末端类型? 2.DNA连接酶 (1)作用:将双链DNA片段“缝合”起来,恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 (2)种类 E·coli DNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 ????大肠杆菌???? ????T4噬菌体???? 特点 只“缝合”????黏性????末端 黏性末端和平末端都可“缝合” 3.载体 (1)条件:能在受体细胞中复制并稳定保存;具有一至多个限制酶切点;具有标记基因。 (2)种类? (3)作用:????携带外源DNA片段进入受体细胞????。 [知能拓展]????(1)基因工程中有3种工具,但工具酶只有2种。 (2)限制酶具有特异性,即一种限制酶只能识别特定的碱基序列,并在特定的位点上进行切割;限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。 (3)限制酶、DNA连接酶、DNA聚合酶等相关酶的分析比较 名称 作用部位 作用底物 形成产物 限制酶 磷酸二酯键 DNA分子 带黏性末端或平末端 的DNA片段 DNA连接酶 磷酸二酯键 DNA片段 重组DNA分子 DNA聚合酶 磷酸二酯键 脱氧核苷酸 子代DNA分子 热稳定DNA聚合酶 磷酸二酯键 脱氧核苷酸 子代DNA分子 DNA(水解)酶 磷酸二酯键 DNA分子 游离的脱氧核苷酸 解旋酶 碱基对间的氢键 DNA分子 脱氧核苷酸长链 RNA聚合酶 磷酸二酯键 核糖核苷酸 单链RNA分子 二、基因工程的基本操作程序 1.目的基因的获取 (1)目的基因:主要指????编码蛋白质????的基因,也可以是一些具????调控????作用的因子。 (2)方法? [知识拓展]????(1)基因组文库与部分基因文库 基因文库类型 基因组文库 部分基因文库(cDNA文库) 构建基因 文库的过程 某种生物全部DNA 　????? 许多DNA片段 ? 受体菌群体 某种生物发育的某个时期的mRNA 　????? cDNA ? 　受体菌群体 (2)PCR技术 ①原理:DNA复制 ②需要条件:模板DNA、引物、四种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶(Taq 酶) ③过程:DNA受热变性解旋为单链、冷却后 RNA引物与单链相应互补序列结合,然后在DNA聚合酶作用下延伸合成互补链。 2.基因表达载体的构建——基因工程的核心 (1)目的:使目的基因????在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代????,同时使目的基因能够表达和发挥作用。 (2)基因表达载体的组成 ? (3)构建过程 ? 3.将目的基因导入受体细胞 (1)受体细胞种类不同,导入方法不同 生物种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 ????农杆菌转化法???? ????显微注射法???? ????转化法???? 受体细胞 体细胞 ????受精卵???? 原核细胞 转化过程 将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上→导入农杆菌→侵染植物细胞→整合到受体细胞的染色体DNA上→表达 将含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 Ca2+处理细胞→感受态细胞→重组表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 (2)基因工程产物不同、选择的受体细胞类型也不相同 ①培育转基因植物:受体细胞可以是受精卵、体细胞(需经植物组织培养成为完整植株) ②培育转基因动物:受体细胞为受精卵,若用体细胞作为受体细胞,则需经核移植技术培养成转基因动物。 ③生产蛋白质产品:一般选用大肠杆菌等原核生物作为受体细胞,因原核生物具有一些其他生物没有的特点,如繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。 ? [易混辨析]????(1)目的基因的插入位点不是随意的,基因表达需要启动子与终止子的调控,目的基因应插入启动子与终止子之间的部位。 (2)基因工程操作过程中只有第三步(将目的基因导入受体细胞)没有碱基互补配对现象。 (3)农杆菌转化法原理:农杆菌易感染双子叶植物和裸子植物,并将其Ti质粒上的T-DNA转移并整合到受体细胞染色体DNA上。 4.目的基因的检测与鉴定 例1????(2016云南师大附中适应性月考,40)根据基因工程的有关知识,回答下列问题: (1)cDNA文库属于　　　????基因文库,其构建方法是:用某种生物发育的某个时期的　　　????反转录产生的cDNA片段,与　　　????连接后储存在一个受体菌群中。 (2)切割DNA分子的工